[發(fā)明專利]一種快速鑒定大量群體洋蔥細胞核育性的KASP標記及其應用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202011253921.0 | 申請日： | 2020-11-11 |
| 公開（公告）號： | CN112251535B | 公開（公告）日： | 2022-09-23 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 楊妍妍;霍雨猛;劉冰江;侯衛(wèi)華;常旭長;吳雄 | 申請（專利權(quán)）人： | 山東省農(nóng)業(yè)科學院蔬菜花卉研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/6895 | 分類號： | C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11 |
| 代理公司： | 濟南圣達知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37221 | 代理人： | 宋海海 |
| 地址： | 250100 山東*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 快速 鑒定 大量 群體 洋蔥 細胞核 kasp 標記 及其 應用 | ||
1.一種快速鑒定大量群體洋蔥細胞核育性的方法，其特征在于，所述方法包括：
基于KASP標記的擴增引物對待測洋蔥材料的基因組DNA進行PCR擴增；檢測并判斷PCR擴增產(chǎn)物中多態(tài)位點的基因型；
所述KASP標記的擴增引物其核苷酸序列如序列表中序列1-3所示；所述序列1和序列2的5'端還設(shè)計有熒光標簽；所述序列1的5'端設(shè)計有第一熒光標簽，所述序列2的5'端設(shè)計有第二熒光標簽，所述第一熒光標簽和第二熒光標簽并不相同；所述第一熒光標簽為FAM，所述第二熒光標簽為HEX。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述PCR擴增的反應程序包括：94℃預變性15min；94℃變性20s，61-55℃退火1min，每一個循環(huán)降低0.6℃，10個循環(huán)；94℃變性20s，55℃退火1min，26-29個循環(huán)。
3.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述方法包括：
a)提取待測洋蔥材料的總DNA；
b)將樣本從96孔板中轉(zhuǎn)移至384孔板中，再最終轉(zhuǎn)移至1536孔板中，確保樣本DNA終濃度為10ng/μl；
c)將裝有DNA樣本的1536孔板進行干燥處理；
d)干燥后的DNA樣本進行PCR體系構(gòu)建；
e)將加好反應體系的孔板進行封膜，并低速快速離心；
f)離心后進行水浴PCR，PCR反應程序包括94℃預變性15min；94℃變性20s，61-55℃退火1min，每一個循環(huán)降低0.6℃，10個循環(huán)；94℃變性20s，55℃退火1min，26-29個循環(huán)；
g)將完成反應的孔板，吹干降溫后在酶標儀Pherastar上進行讀板，采用SNPviewer2軟件對掃描數(shù)據(jù)進行分析，根據(jù)分析結(jié)果確定洋蔥細胞核的基因型即檢測洋蔥樣品的細胞核育性。
4.權(quán)利要求1中所述KASP標記的擴增引物在洋蔥雄性不育系和配套保持系選育中的應用。
5.權(quán)利要求1中所述KASP標記的擴增引物在快速鑒定大量群體洋蔥細胞核育性中的應用。
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