[發(fā)明專利]基于KASP技術用于水稻整個生育期耐冷基因分型的引物組合及應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011253676.3
• 申請日: 2020-11-11
• 公開（公告）號: CN112251534B
• 公開（公告）日: 2023-09-22
• 發(fā)明（設計）人: 王記林;王電文;陳紅萍;田春杰;鄧偉;陳大洲
• 申請（專利權）人: 江西省農業(yè)科學院水稻研究所;中國科學院東北地理與農業(yè)生態(tài)研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京路浩知識產(chǎn)權代理有限公司 11002
• 代理人: 陳征

1.一種引物組合物，其特征在于，含有8個特異性引物組，所述8個特異性引物組中，每組含有2條上游引物，1條下游引物，稱為上游引物1，上游引物2，下游引物；8個特異性引物組中含有引物的核苷酸序列分別如SEQ?ID?NO.1-3，SEQ?ID?NO.4-6，SEQ?ID?NO.7-9，SEQID?NO.10-12，SEQ?ID?NO.13-15，SEQ?ID?NO.16-18，SEQ?ID?NO.19-21，SEQ?ID?NO.22-24所示。

2.含有權利要求1所述引物組合物的檢測試劑盒。

3.權利要求1所述的引物組合物或權利要求2所述的檢測試劑盒在水稻耐冷基因分型中的應用。

4.權利要求1所述的引物組合物或權利要求2所述的檢測試劑盒在水稻整個生育期鑒定耐冷水稻品種、或在水稻耐冷基因有利等位基因鑒別、或水稻不同耐冷基因有利單倍型組合篩選中的應用。

5.權利要求1所述的引物組合物或權利要求2所述的檢測試劑盒在基因型輔助選擇水稻育種改良中的應用。

6.一種水稻耐冷基因分型方法，其特征在于，采用權利要求1所述的引物組合物，以待測水稻樣品的DNA為模板，基于KASP技術進行PCR擴增，采用熒光檢測儀分析PCR擴增產(chǎn)物的基因型；8個引物組的上游引物1均標記相同的熒光基團，8個引物組的上游引物2均標記相同的熒光基團，且每組中兩條上游引物標記的熒光基團不同。

7.根據(jù)權利要求6所述的水稻耐冷基因分型方法，其特征在于，所述PCR擴增的反應體系中，引物混合液含有8個引物組的引物，且每組兩條上游引物的終濃度均為12?mM，下游引物終濃度為30?mM；或所述PCR擴增的反應條件為：94°C預變性15分鐘；第一步擴增反應：94°C變性20秒，61°C-55°C梯度退火并延伸60秒，10個循環(huán)，每個循環(huán)退火及延伸的溫度降低0.6°C；第二步擴增反應，94°C變性20秒，55°C退火并延伸60秒，32個循環(huán)。