[發(fā)明專利]一種融合基因及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011250485.1
• 申請(qǐng)日: 2020-11-10
• 公開（公告）號(hào): CN112359053B
• 公開（公告）日: 2022-05-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 郝碧芳;孫璐萍;劉娜;徐灜;潘世佳;沈興家;黃金山
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇科技大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/62
• 分類號(hào): C12N15/62;C12N15/866;C12N15/67;C12N7/01;A61K39/12;A61P31/14;C12R1/93
• 代理公司: 南京經(jīng)緯專利商標(biāo)代理有限公司 32200
• 代理人: 唐循文

1.一種融合基因，其特征在于，所述融合基因由重組家蠶桿狀病毒vBmBac-egfp-gp_short中截短埃博拉囊膜蛋白GP基因的3’端與SEQ ID NO.1所示的序列融合組成，所述重組家蠶桿狀病毒vBmBac-egfp-gp_short由以下方法構(gòu)建：用引物5’-CGCTCTAGAATGGGCGTTACAGGAATATTG-’3及5’- CCCGGATCCGTCTCCATCCTGTCCACCAAT-’3，以含有埃博拉囊膜蛋白GP基因的質(zhì)粒pFBD-egfp-gp1,2為模板，PCR方法擴(kuò)增目的基因，擴(kuò)增片段用Xba I和Bam HI酶切，獲得截短埃博拉囊膜蛋白GP基因；合成外源序列：5’CGCGGATCCATGTTTGGTCATGTAGCTACCTTTGTAATTGTATTTATTGTAATTTTATTTTTGTACTGTATGGTTAGAAACCGTAATAGTAGACAATATTAAAAGCTTCCC3’，用BamHI和Hind III酶切，回收，備用；分別用XbaI與HindIII酶切質(zhì)粒pFast-egfp-gp1,2，回收載體，備用；將上述截短埃博拉囊膜蛋白GP基因、回收的合成外源序列和回收的載體按照常規(guī)分子生物學(xué)方法連接，轉(zhuǎn)化DH10B感受態(tài)細(xì)胞，篩選重組供體質(zhì)粒，鑒定后，命名pFBD-egfp-gp_short，提取其DNA，溶解于20 μL超純水備用；取0.4μg上述構(gòu)建載體pFBD-egfp-gp_short轉(zhuǎn)化攜帶 BmBacJS13和輔助質(zhì)粒的 DH10B 感受態(tài)細(xì)胞中，轉(zhuǎn)接大腸桿菌液體培養(yǎng)基中37℃ 培養(yǎng) 4h，然后在含有 Kanamycin，Gentamicin和IPTG、X-gal 的固體培養(yǎng)基平板上篩選重組 Bacmid，挑取白斑菌落入大腸桿菌液體培養(yǎng)基，過夜培養(yǎng)后，提取DNA，PCR進(jìn)一步鑒定，篩選正確的重組Bacmid，命名為BmBac-egfp-gp_short，在35 mm 細(xì)胞培養(yǎng)皿中各接種約5×10⁵個(gè)/ 皿的BmN細(xì)胞，貼壁后，用2μLlipofectin轉(zhuǎn)染試劑、30 μL無血清培養(yǎng)基和2 μg BmBac-egfp-gp_short DNA混合液轉(zhuǎn)染細(xì)胞，轉(zhuǎn)染4 h后，除去轉(zhuǎn)染混合液，添加新鮮培養(yǎng)基常規(guī)培養(yǎng)，72小時(shí)后，收集上清，取50μL收集上清，繼續(xù)感染健康BmN細(xì)胞，72小時(shí)收集上清，獲得重組家蠶桿狀病毒vBmBac-egfp-gp_short。

2.權(quán)利要求1所述融合基因在提高重組家蠶桿狀病毒中BV病毒粒子中埃博拉膜蛋白GP表達(dá)量的應(yīng)用。

3.權(quán)利要求1所述融合基因在提高重組家蠶桿狀病毒中BV病毒囊膜中埃博拉GP蛋白表達(dá)量的應(yīng)用。

4.權(quán)利要求1中所述重組家蠶桿狀病毒vBmBac-egfp-gp_short在制備GP疫苗中的應(yīng)用。