[發明專利]適用于柑橘枯萎病的微生物菌劑及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202011246517.0
• 申請日: 2020-11-10
• 公開（公告）號: CN112522111A
• 公開（公告）日: 2021-03-19
• 發明（設計）人: 劉海明;李碩;姜秀娟;呂中文;程淑琴;杜蓉蓉
• 申請（專利權）人: 北京航天恒豐科技股份有限公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N1/20;A01N63/22;A01N63/38;A01P3/00;A01P21/00;C12R1/885;C12R1/07
• 代理公司: 北京鴻元知識產權代理有限公司 11327
• 代理人: 王守梅;袁文婷

1.一種適用于柑橘枯萎病的微生物菌劑，其特征在于，所述微生物菌劑由解淀粉芽孢桿菌菌劑和哈茨木霉菌菌劑組成；所述適用于柑橘枯萎病的微生物菌劑中的解淀粉芽孢桿菌和哈茨木霉菌有效活菌數均不少于1.0*10¹¹CFU/g。

2.根據權利要求1所述的適用于柑橘枯萎病的微生物菌劑，其特征在于，所述解淀粉芽孢桿菌為解淀粉芽孢桿菌FZB42菌株。

3.根據權利要求1所述的適用于柑橘枯萎病的微生物菌劑，其特征在于，所述解淀粉芽孢桿菌菌劑和哈茨木霉菌菌劑的重量比為2～3:1。

4.權利要求1-3所述的微生物菌劑在柑橘枯萎病中的應用。

5.一種適用于柑橘枯萎病的微生物菌劑的制備方法，其特征在于，

將解淀粉芽孢桿菌活化后，接種到解淀粉芽孢桿菌的液體種子培養基中培養以獲得解淀粉芽孢桿菌發酵種子液；其中，解淀粉芽孢桿菌菌量為1*10⁸CFU/ml；

將哈茨木霉菌活化后，接種到哈茨木霉菌液體種子培養基中培養以獲得哈茨木霉菌發酵種子液；其中，哈茨木霉菌菌液孢子濃度調至1*10⁶個/ml；

按重量比稱取51％的稻草、25.5％的麥麩、1.5％米糠、21.5％的貝殼粉和0.5％的(NH₄)₂SO₄混合形成發酵料，加水使發酵料的含水率至75％，攪拌均勻后裝入聚丙烯菌袋，每袋150g，121℃滅菌20min，獲得滅菌后的發酵料；

向滅菌后的發酵料中加入3ml解淀粉芽孢桿菌發酵種子液及5ml哈茨木霉菌發酵種子液，室溫發酵12天；培養12天后，對發酵產物進行干燥，通過篩分將發酵料與分生孢子分離，收集孢子粉并于4℃條件下保存，獲得解淀粉芽孢桿菌與哈茨木霉菌的混合菌劑。

6.根據權利要求5所述的適用于柑橘枯萎病的微生物菌劑的制備方法，其特征在于，將4℃保存的解淀粉芽孢桿菌和哈茨木霉菌分別用NA和PDA平板活化，于28℃恒溫培養箱中分別培養2天和5天；將解淀粉芽孢桿菌接種到BYP液體培養基中，28℃、180轉/min的恒溫振蕩培養箱中培養2天；將長滿孢子的哈茨木霉菌株每平板加10ml滅菌生理鹽水，用涂布器將孢子囊掛下接種到PDB培養基中，28℃、180轉/min恒溫振蕩培養箱中培養5天。