[發明專利]一種狼瘡抗凝物的確認試劑及其制備方法

有效

• 申請號: 202011246227.6
• 申請日: 2020-11-10
• 公開（公告）號: CN112557665B
• 公開（公告）日: 2023-06-09
• 發明（設計）人: 隋延峰;胡軍;鄒紅建
• 申請（專利權）人: 北京美創新躍醫療器械有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/573
• 代理公司: 北京信遠達知識產權代理有限公司 11304
• 代理人: 趙興華

本發明涉及生物技術領域，特別涉及一種狼瘡抗凝物的確認試劑及其制備方法。該確認試劑包括三羥甲基氨基甲烷、凝血因子X激活劑、兔腦磷脂、明膠、甘氨酸、海藻糖、硫柳汞鈉、氯化鈣。本發明狼瘡抗凝物確認試劑盒通過調整穩定劑的濃度和組分，使狼瘡抗凝物確認試劑盒穩定性好、抗干擾能力強，試劑復溶2?8℃放置可以穩定10天，凍干粉2?8℃放置可以穩定2年。本發明穩定性優于一般的市售產品，使試劑得到充分利用，減少了試劑浪費，使醫院很好的節約成本。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別涉及一種狼瘡抗凝物的確認試劑及其制備方法。

背景技術

狼瘡抗凝物質(LA)是病理性循環抗凝物質，為IgG、IgM或兩者混合型。LA通過識別磷脂結合凝血酶原，阻斷活化的凝血因子Ⅴ與凝血酶原作用，抑制纖維蛋白的形成，在體外干擾APTT、PT、dRVVT凝血試驗，致使凝血時間延長。

在體內，LA可激活血小板和(或)通過β2-GPI結合，誘導黏附分子、組織因子表達及補體活化而產生血栓前狀態，促進血栓形成。LA與血管內皮細胞膜磷脂作用，干擾內皮細胞釋放纖溶酶原激活物而抑制纖溶；LA與血小板膜磷脂作用，干擾花生四烯酸代謝，促進血小板活化；LA可抑制與磷脂相關的內源性抗凝物質，使血液凝固性增強。LA檢測陽性患者中約有1/3發生血栓，最常見的是深靜脈血栓、肺栓塞及大血管血栓、血小板減少癥、產科表現為不明原因的習慣性流產、死胎、胎兒發育遲滯。因此，提供一種LA的檢測試劑具有重要的現實意義。

檢測原理：在受檢血漿中加入確認試劑(LAC)，凝血因子X激活劑直接激活凝血因子X成為活化的凝血因子X，在鈣和過量磷脂的參與下使血液凝固，測定凝固時間，血漿中如果存在狼瘡抗凝物(LA)，磷脂會中和狼瘡抗凝物(LA)，測定血漿凝固時間會在正常參考范圍內。此檢驗，主要用于經過狼瘡抗凝物(LA)篩選試劑(LAS)篩選血漿樣本后的異常樣本(凝固時間超出正常參考范圍)的確認。

現有的狼瘡抗凝物確認試劑存在穩定性差的問題，而且標本中的血紅蛋白、膽紅素、甘油三酯、肝素會干擾檢測結果的準確性。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了一種狼瘡抗凝物的確認試劑及其制備方法。該狼瘡抗凝物確認檢測試劑(LAC)具有高穩定性、對其它干擾物質的抗干擾能力強、高靈敏度的優點。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種狼瘡抗凝物的確認試劑，包括凝血因子X激活劑、兔腦磷脂、緩沖液、明膠、甘氨酸、海藻糖、硫柳汞鈉和氯化鈣；

確認試劑中各組分用量為：

在本發明中，檢測試劑中腦磷脂選自兔腦磷脂，相比卵磷脂、豬腦磷脂、牛腦磷脂、大豆磷脂、花生磷脂、合成磷脂等，兔腦磷脂配合本發明確認試劑中其它試劑后使得確認試劑的穩定性更強，從而本發明試劑具備了穩定性好、保質期長等特點；

檢測試劑中緩沖液為Tris-Hcl緩沖溶液，相比磷酸鹽緩沖液、碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖液、檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液、HEPES緩沖液，PH為7.4的Tris-HCl緩沖液配合本發明確認試劑中其它試劑后使得確認試劑的穩定性更強，從而本發明試劑具備了穩定性好、保質期長等特點；

現有技術中，凍干保護劑、穩定劑一般有糖類(蔗糖、海藻糖、乳糖、葡萄糖等)、聚合物類(聚乙二醇、pvp、明膠、聚乙烯亞胺等)、氨基酸類(甘氨酸、精氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、蘇氨酸、懶氨酸等)，本發明優選明膠、甘氨酸、海藻糖的組合作為本發明凍干保護劑、穩定劑，配合本發明確認試劑中其它試劑后使得確認試劑的穩定性更強，從而本發明試劑具備了穩定性好、保質期長等特點；

檢測試劑中防腐劑優選硫柳汞鈉，相比疊氮鈉、硫柳汞鈉、山梨酸鉀、乳酸鈉等防腐劑有，硫柳汞鈉作為本發明的防腐劑，配合本發明確認試劑中其它試劑后使得確認試劑的穩定性更強，從而本發明試劑具備了穩定性好、保質期長等特點。