[發明專利]一種降解菌劑及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202011245229.3
• 申請日: 2020-11-10
• 公開（公告）號: CN112280564A
• 公開（公告）日: 2021-01-29
• 發明（設計）人: 滕應;王貝貝
• 申請（專利權）人: 中國科學院南京土壤研究所
• 主分類號: C09K17/40
• 分類號: C09K17/40;C12N1/20;B09C1/10;C12R1/01
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 唐循文

1.一種降解菌劑，其特征在于包括胡敏酸和蒙脫石中的至少一種和苯并[a]芘降解菌噬氨副球菌（Paracoccus aminovorans）HPD-2，施加于土壤后胡敏酸質量含量為土壤質量的0.2%-0.5%的，蒙脫石質量含量為1%-2%，苯并[a]芘降解菌噬氨副球菌（Paracoccus aminovorans）HPD-2的含量按土壤干重計為10⁷-10⁸ CFU/g。

2.根據權利要求1所述降解菌劑，其特征在于所述胡敏酸質量含量為0.5%，蒙脫石質量含量為2%。

3.權利要求1或2所述降解菌劑的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）噬氨副球菌HPD-2的培養及菌懸液的制備：

將保存于-80 ℃的噬氨副球菌菌株取出，接種于液體LB培養基中，在30 ℃、150 r/min條件下培養16 h，按5vol.%接種到含有5 mg/L苯并[a]芘的無機鹽培養基中繼續培養24 h；隨后按5vol.%再次接種到LB培養基中培養16-20 h，離心獲得上述菌體的對數生長期細胞；用生理鹽水洗滌2次后重新懸浮于無菌水中，菌體數量約為10⁹ CFU/mL，記為菌懸液A；

（2）降解菌劑的制備：

將菌懸液A分別添加到蒙脫石粉末、胡敏酸粉末中制成蒙脫石菌劑和胡敏酸菌劑；將菌懸液A按比例添加到由蒙脫石和胡敏酸組成的混合物中，制備成復合菌劑。

4.根據權利要求3所述降解菌劑的制備方法，其特征在于所述液體LB培養基成分及用量：酵母提取物5.0 g/L，蛋白胨10.0 g/L，NaCl 10.0 g/L，其余為去離子水，調節pH為7.0，在0.12 MPa、121 ℃下滅菌20 min備用。

5.根據權利要求3所述降解菌劑的制備方法，其特征在于所述含有苯并[a]芘的無機鹽培養基成分及用量：每升去離子水含K₂HPO₄ 6.0 g，KH₂PO₄ 5.5 g，Na₂SO₄ 2.0 g，KCl 2.0g，NH₄NO₃ 2.0 g，MgSO₄·7H₂O 0.2 g，微量元素溶液1.0 mL，調節pH為7.2，在0.12 MPa、121℃下滅菌20 min備用；隨后加入過濾除菌的苯并[a]芘貯存液，使其濃度為5 mg/L。

6.根據權利要求3所述降解菌劑的制備方法，其特征在于步驟（1）中所述生理鹽水為0.85%的NaCl溶液。

7.根據權利要求3所述降解菌劑的制備方法，其特征在于步驟（1）中所述離心處理為以10000 r/min的速度離心2 min。

8.權利要求1或2所述降解菌劑在多環芳烴污染土壤修復中的應用。