[發明專利]一種鑒別近單雙倍體惡性間皮瘤的標志物及其鑒別方法

在審

• 申請號: 202011244473.8
• 申請日: 2020-11-10
• 公開（公告）號: CN112391413A
• 公開（公告）日: 2021-02-23
• 發明（設計）人: 歐文斌;袁麗;陳麗敏;孫伯姝
• 申請（專利權）人: 浙江理工大學
• 主分類號: C12N15/867
• 分類號: C12N15/867;C12N15/65;C12N15/54;C12N5/10;G01N33/573;G01N33/574
• 代理公司: 杭州九洲專利事務所有限公司 33101
• 代理人: 陳琦;陳繼亮

一種鑒別近單雙倍體惡性間皮瘤的標志物，所述標志物為甲基化酶SETDB1，所述SETDB1通過表達顯著抑制了間皮瘤細胞的生長、克隆形成、ROS生成以及體內腫瘤生長，在間皮瘤細胞中發揮腫瘤抑制子的功能，并在近單倍體間皮瘤細胞中表達缺失，卻在近雙倍體間皮瘤細胞中正常表達，從而鑒別近單雙倍體惡性間皮瘤，本發明通過甲基化酶SETDB1來鑒別解決了惡性間皮瘤中近單雙倍體特征，從而可以快速的判斷腫瘤發展情況。

技術領域

本發明涉及作用于鑒別近單倍體和近雙倍體惡性間皮瘤的診斷標志物，屬于生物醫學分析領域。

背景技術

惡性間皮瘤(malignant mesothelioma，MM)是一種侵襲性胸膜腫瘤，具有高度侵襲性和預后差的特征。空氣中的石棉暴露是間皮瘤發生、發展主要的致病因素，職業輻射和既往的胸部輻射治療也是間皮瘤發展的危險因素。惡性間皮瘤潛伏期時間長，發病高峰期在接觸后45年，其總體5年生存率為8.5％，近幾十年來其發病率持續上升。

惡性間皮瘤在臨床上早期癥狀不明顯，大多數患者在確診時已是晚期。目前，治療MM的方法包括手術、放療和化療，但均未能顯著改善患者生存時間。手術切除包括胸膜切除術/切除縱隔淋巴結/胸膜外肺切除術等，通常適用于上皮樣型MM年輕患；放射治療可以緩解晚期疾病的癥狀，但難以避開周圍正常組織，且對完整肺的毒性很高；對于不能進行手術和放療的晚期患者，化療成為他們唯一的選擇。

SETDB1是組蛋白甲基轉移酶家族的成員之一，人源SETDB1由1291個氨基酸殘基組成，全長約143.1kDa，含有22個外顯子(Gene ID：9869)，其主要引起組蛋白H3第9位的賴氨酸殘基發生甲基化，在基因轉錄抑制和常染色體基因沉默的生物網絡中具有多重調控功能。已有研究表明SETDB1在間皮瘤細胞中存在一定的突變率，但其功能未知。

MM腫瘤細胞根據其染色體數目缺失數，可分為近單倍體核型(Near-haploid)和近雙倍體核型(Near-diploid)。在惡性間皮瘤中，近單倍體核型較少(小于5％)，目前僅有一例雙相樣MM的近單倍體核型被報道，而近雙倍體型則較為常見。有研究者認為近單倍體型的產生會導致大量遺傳物質損失，可能影響腫瘤進展無關的區域，但這種損失也可能會消除重要腫瘤抑制基因，導致腫瘤發展。

發明內容

本發明的目的在于為鑒別近單倍體和近雙倍體惡性間皮瘤尋找新的標志物及其發現該標志物的腫瘤抑制功能。

本發明的目的是通過如下技術方案來完成的，一種鑒別近單雙倍體惡性間皮瘤的標志物，其特征在于所述標志物為甲基化酶SETDB1，所述SETDB1通過表達顯著抑制了間皮瘤細胞的生長、克隆形成、ROS生成以及體內腫瘤生長，在間皮瘤細胞中發揮腫瘤抑制子的功能，并在近單倍體間皮瘤細胞中表達缺失，卻在近雙倍體間皮瘤細胞中正常表達，從而鑒別近單雙倍體惡性間皮瘤。

一種利用權利要求1所述的鑒別近單雙倍體惡性間皮瘤的鑒別方法，該方法包括如下步驟：

a.分別構建攜帶Lenti-GFP、Lenti-SETDB1、Lenti-SETDB1-GFP基因的慢病毒表達載體，并感染近單倍體間皮瘤細胞株,建立過表達SETDB1模型，western blot；

b.嘌呤霉素篩選30天建立穩轉細胞株Lenti-GFP、SETDB1、SETDB1-GFP，通過CTG法檢測細胞生長；

c.嘌呤霉素篩選30天建立穩轉細胞株Lenti-GFP、SETDB1、SETDB1-GFP，進行克隆形成實驗并定量分析；

d.嘌呤霉素篩選30天建立穩轉細胞株Lenti-GFP、SETDB1-GFP，檢測細胞活性氧ROS水平；

e.穩轉細胞株裸鼠成瘤實驗；

f.將正常間皮細胞、各組近單倍體和近雙倍體間皮瘤細胞裂解，western blot。