[發(fā)明專利]一種腦癱小鼠動物模型的構(gòu)建及評價方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011242620.8
• 申請日: 2020-11-09
• 公開（公告）號: CN112243949A
• 公開（公告）日: 2021-01-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 魏偉;嵐山芮;李永生
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州市天河諾亞生物工程有限公司
• 主分類號: A01K67/02
• 分類號: A01K67/02
• 代理公司: 廣州三環(huán)專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 顏希文

本發(fā)明涉及動物模型構(gòu)建技術(shù)領(lǐng)域，具體公開了一種腦癱小鼠動物模型的構(gòu)建與評價方法，本發(fā)明的構(gòu)建方法包括以下步驟：S1.取NOD?SCID?IL2Rg?/?(NSI)免疫缺陷孕鼠腹腔注射LPS，致使孕鼠感染，自然分娩小鼠幼仔，阻止小鼠幼仔血液循環(huán)；S2.將處理后的免疫缺陷小鼠幼仔送回母親共處，然后放置在有機玻璃缺氧室中，將含氧的氮氧混合物注入缺氧室內(nèi)；S3.將免疫缺陷小鼠幼仔送回至母親共處。本發(fā)明的構(gòu)建方法在簡化操作的前提下，能同時減輕實驗動物的痛苦，構(gòu)建的腦癱動物模型更加接近真實人體內(nèi)環(huán)境，為治療腦癱疾病提供了堅實的基礎(chǔ)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及動物模型構(gòu)建技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及一種腦癱小鼠動物模型的構(gòu)建與評價方法。

背景技術(shù)

腦性癱瘓，簡稱腦癱，是出生前至出生后腦發(fā)育階段，各種原因所致的非進行性腦損傷綜合征，是造成小兒肢體殘疾的主要疾病。WHO報道全球每年有5‰新生兒發(fā)生腦癱，我國部分地區(qū)發(fā)病率為0.5‰～2‰。目前，腦癱發(fā)病的機制尚不明確。臨床上對腦癱患者還沒有有效的治療手段，僅僅局限于特別臨床護理。

為明確其發(fā)病機制，并針對其進行有效的預(yù)防和治療，國內(nèi)外制作了大量的腦癱動物模型，其中鼠類因神經(jīng)解剖與人類極為接近、大小合適、腦體積小便于腦組織病理變化和生化改變的觀察，而且比較經(jīng)濟，廣泛應(yīng)用于腦癱模型的研究。目前腦癱模型制備方法大致有缺血缺氧型、感染型、神經(jīng)毒素型、腦外傷型、多法聯(lián)合型五種。缺血缺氧模型是比較常用的腦癱動物模型，主要有三種造模方式：單側(cè)頸動脈結(jié)扎法、雙側(cè)頸動脈結(jié)扎法、子宮動脈結(jié)扎。感染模型主要包括腹腔內(nèi)感染模型和宮內(nèi)感染模型。神經(jīng)毒素模型主要有膽紅素模型、甲基汞模型和三硝基丙酸模型。腦外傷模型有腦組織切除法、液壓沖擊法、加速致傷法、自由落體打擊法、各種腦組織破壞法等。多法聯(lián)合模型就是將兩種以上的造模方法聯(lián)合應(yīng)用，從多角度呈現(xiàn)腦癱多因素致病的特點。

檢驗動物模型常用的方法有以下幾點:(1)神經(jīng)行為學檢測：目前腦癱的診斷主要依靠其特征性的臨床表現(xiàn)，即空間學習認知能力、運動功能的損害，姿勢的異常等，檢測方法主要有Morris水迷宮、足印重復間距分析試驗、平衡木試驗、平衡木試驗等。(2)病理形態(tài)學：組織病理學檢測可以客觀直觀的獲取到組織形態(tài)學圖片，可以清晰的觀察到腦皮層細胞排列是否整齊，輪廓是否清晰，結(jié)構(gòu)是否完整以及有無異型性細胞等。(3)神經(jīng)電生理檢測：神經(jīng)電生理方法對腦癱的檢測近年來得到了飛速的發(fā)展。(4)分子生物學指標：該測定為后續(xù)細胞移植與基因治療腦癱提供了理論依據(jù)。

但是，目前尚沒有能夠模擬各種類型腦癱公認的、理想的動物模型。每一種動物模型都有其優(yōu)勢與不足。例如，各種模型的建立過程都是對實驗動物的摧殘過程，操作過程專業(yè)性要求較高，受到一定的局限性，并且當研究人源干細胞對腦癱的治療作用時，由于普通小鼠與人體內(nèi)環(huán)境有很大差別，加之用藥引起的免疫反應(yīng)，其研究結(jié)果與真實情況容易相差較大，因此，亟需一種在簡化操作下，能同時減輕動物痛苦的腦癱小鼠動物模型的構(gòu)建與評價方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服上述現(xiàn)有技術(shù)的不足之處而提供一種腦癱小鼠動物模型的構(gòu)建與評價方法，經(jīng)過本發(fā)明人大量實驗摸索，結(jié)果發(fā)現(xiàn)通過本發(fā)明的構(gòu)建方法可以建立腦癱小鼠動物模型，在簡化操作的前提下，能同時減輕實驗動物的痛苦，并且構(gòu)建的腦癱動物模型更加接近真實人體內(nèi)環(huán)境，為治療腦癱疾病提供了堅實的基礎(chǔ)。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為：

本發(fā)明第一目的是提供了一種腦癱小鼠動物模型的構(gòu)建方法，其包括以下步驟：

S1.取NOD-SCID-IL2Rg-/-(NSI)免疫缺陷孕鼠腹腔注射LPS，致使孕鼠感染，自然分娩取NOD-SCID-IL2Rg-/-(NSI)免疫缺陷小鼠幼仔，阻止NOD-SCID-IL2Rg-/-(NSI)免疫缺陷小鼠幼仔血液循環(huán)；