[發(fā)明專利]一種PRRSV的IFA抗體檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011240714.1
• 申請日: 2020-11-09
• 公開（公告）號: CN112379104A
• 公開（公告）日: 2021-02-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王選年;李鵬;馮春花;王利平;高小靜;孫國鵬;岳鋒;李紅;朱艷平;郭東光;張艷芳;齊永華;潘鵬濤
• 申請（專利權(quán)）人: 新鄉(xiāng)學(xué)院
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/569;G01N33/58;G01N33/543
• 代理公司: 北京慕達星云知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 王敏

1.一種PRRSV的IFA抗體檢測方法，其特征在于，具體步驟如下：

(1)接毒：當細胞瓶內(nèi)Marc145細胞長至50-70％時，將100個TCID₅₀的PRRSV病毒液接種到Marc145細胞上，加入含2％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基進行培養(yǎng)；

(2)鋪板：細胞長滿后將其鋪到96孔板內(nèi)，每孔接種100μl，置于CO₂培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)24h，觀察細胞生長情況；待細胞長滿后，取出96孔板；同時設(shè)立不接毒正常細胞對照孔；

(3)固定：把取出的96孔板用PBS沖洗2-3次，然后用預(yù)冷的無水乙醇于-20℃固定30min，細胞反應(yīng)板制備成功；

(4)加一抗：把細胞反應(yīng)板用PBS洗過2-3次，加入100μl用0.01M PBS 1:400稀釋的PRRSV標準陽性血清，置于37℃中作用1.0h；

(5)加二抗：加入100μl用0.01M PBS(pH7.4)稀釋200倍的羊抗豬IgG-FITC熒光抗體，37℃作用1h；

(6)結(jié)果觀察：用PBS沖洗后置于熒光顯微鏡下觀察顯色結(jié)果。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種PRRSV的IFA抗體檢測方法，其特征在于，所述PRRSV病毒液的制備方法如下：將PRRSV的病料組織用PBS沖洗，剪碎后1g組織樣品加入1mL PBS，反復(fù)凍融三次，制成病料研磨液。