[發明專利]一種rhGH中和抗體的檢測方法

在審

• 申請號: 202011240115.X
• 申請日: 2020-11-09
• 公開（公告）號: CN112362649A
• 公開（公告）日: 2021-02-12
• 發明（設計）人: 劉麗慧;于昊嬴;王英武;王富偉;王璐璐
• 申請（專利權）人: 長春金賽藥業有限責任公司
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;G01N21/64;G01N1/28
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 潘穎

本發明涉及生物制藥領域，特別涉及一種rhGH中和抗體的檢測方法。該方法包括：將樣品置于50～60℃條件下滅活30～35分鐘；樣品包括待檢血清樣品、陰性對照樣品、陽性對照樣品；將滅活后的樣品與rhGH工作液混合，在CO₂條件下進行孵育，得到中和后的樣品；將細胞懸液與中和后的樣品混合，在CO₂條件下進行細胞培養；將細胞顯色液與培養后的細胞混合，室溫下避光靜置；采用熒光細胞活性檢測系統檢測活細胞數目，得到待檢血清樣品的抑制率，判斷待檢血清樣品中是否存在rhGH中和抗體。該方法靈敏度高，能檢測出人血清中較低濃度的rhGH中和抗體。抗血清干擾能力強，藥物耐受水平也比較高，可應用于rhGH藥物受試者群體。

技術領域

本發明涉及生物制藥領域，特別涉及一種rhGH中和抗體的檢測方法。

背景技術

重組人生長激素(Recombinant Human Growth Hormone，rhGH)的氨基酸含量、空間構象及序列與人生長激素完全相同，具有與人體內源性生長激素等同的生物學作用：刺激骨骺端軟骨細胞分化、增殖，刺激軟骨基質細胞增長，刺激成骨細胞分化、增殖，引起線性生長加速及骨骼變寬；促進全身蛋白質合成，糾正手術等創傷后的負氮平衡狀態，糾正重度感染及肝硬化等所致低蛋白血癥；刺激免疫球蛋白合成，刺激淋巴樣組織、巨噬細胞和淋巴細胞的增殖，增強抗感染能力；刺激燒傷創面及手術切口膠原體細胞合成纖維細胞以及巨噬細胞分裂增殖，加速傷口愈合；促進心肌蛋白質合成，增加心肌收縮力，降低心肌耗氧量，調節脂肪代謝，降低血清膽固醇、低密度脂蛋白的水平；補充生長激素分泌不足或缺乏，調節成人的脂肪代謝、骨代謝、心腎功能。

隨著對生物藥物免疫原性的檢測越來越重視，給藥過程中產生的中和抗體的檢測也成為藥物開發階段的重要關注點。中和抗體能夠通過直接與藥物作用結合位點結合，或者通過空間位阻的作用使藥物失去與其靶點結合的能力，從而阻斷、中和藥物的治療活性。因此，在藥物開發過程中(包括臨床前研究和臨床試驗階段)，對中和抗體的檢測和評價已經成為藥品監管部門的常規要求，由于細胞學檢測方法更能接近體內的藥物作用情況。與其他免疫原性檢測方法相比(如Elisa方法)，基于細胞的檢測方法所用細胞的表面受體呈自然狀態，更能模擬體內藥物與受體結合的過程，所以中和抗體的檢測方法FDA推薦使用細胞學方法(FDA,Guidance for Industry:Immunogenicity Testing of TherapeuticProtein Products—Developing and Validating Assays for Anti-Drug AntibodyDetection.2019)。

基于細胞學檢測中和抗體的方法，由于細胞引入的不確定因素較多，一直以來都存在靈敏度低的問題。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了一種穩定的基于細胞學的rhGH抗體中和活性測定方法。該方法靈敏度高，能檢測出人血清中較低濃度的rhGH中和抗體。抗血清干擾能力強，藥物耐受水平也比較高，可應用于rhGH藥物受試者群體。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種rhGH中和抗體的檢測方法，包括以下步驟：

步驟1：將樣品置于50～60℃條件下滅活30～35分鐘；樣品包括待檢血清樣品、陰性對照樣品、陽性對照樣品；

步驟2：將滅活后的樣品與rhGH工作液混合，在37℃、5％CO₂培養箱中進行孵育，得到中和后的樣品；

步驟3：將細胞懸液與中和后的樣品混合，在37℃、5％CO₂條件下進行細胞培養；

步驟4：將細胞顯色液與培養后的細胞混合，室溫下避光靜置；

步驟5：采用熒光細胞活性檢測系統檢測活細胞數目，得到待檢血清樣品的抑制率，判斷待檢血清樣品中是否存在rhGH中和抗體。