[發明專利]一種基于鑭系元素化學發光法長效生長激素免疫定量檢測試劑盒及其方法

在審

• 申請號: 202011238934.0
• 申請日: 2020-11-09
• 公開（公告）號: CN112362643A
• 公開（公告）日: 2021-02-12
• 發明（設計）人: 王富偉;王珊;王英武;王秋實;耿昕穎
• 申請（專利權）人: 長春金賽藥業有限責任公司
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76;G01N21/64;G01N33/68
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 潘穎

本發明涉及生物制藥領域，特別是涉及一種基于鑭系元素化學發光法長效生長激素免疫定量檢測試劑盒及其方法。該試劑盒包括：PEG抗體、微孔板，生物素標記的PEG?rhGH抗體工作液，鏈霉親和素標記的鑭系元素銪工作液，增強解離液，PEG?rhGH抗原標準品和質控品。本發明經過方法學評估，結果顯示試劑盒靈敏度高、特異性好，準確度更高，為滿足長效生長激素藥物臨床分析和評價提供了一種技術手段。

技術領域

本發明涉及生物制藥領域，特別是涉及一種基于鑭系元素化學發光法長效生長激素免疫定量檢測試劑盒及其方法。

背景技術

生長激素(Growth Hormone，GH)是一種垂體分泌源的蛋白質，參與調節生長發育過程中的代謝，其缺乏可以導致兒童生長發育遲緩，成人則為生長激素缺乏綜合征，重組人生長激素(rhGH)可以糾正上述癥狀。由于rhGH的半衰期短，需要每日皮下注射，大大增加了治療者的痛苦。為了延長半衰期，長效重組生長激素藥物成為目前生物技術藥物的研發主流；從技術上講，聚乙二醇(PEG)化技術是目前最重要的蛋白融合技術。

盡管長效生長激素(PEG-rhGH)藥物進展迅速，但尚無檢測其完整分子的免疫定量方法，市售試劑盒通常采用夾心酶聯免疫吸附法，包被抗體和檢測抗體均為抗GH的抗體，不能檢測藥物中PEG是否在體內仍與藥物連接，且血清中含有內源性GH，易與包被板上抗GH的抗體結合，無法特異檢測PEG-rhGH，反應PEG-rhGH在體內的代謝情況。如何選擇包被抗體和檢測抗體，特異性識別PEG-rhGH完整分子是本方法的難點。因此，生物技術藥物領域的科研工作者迫切建立靈敏、特異的PEG-rhGH藥物的定量檢測方法并探索其可行性，從而滿足此類藥物臨床分析和評價需求。

解離增強鑭系熒光免疫分析法(Dissociation-enhanced lanthanidefluorescence immunoassay，DEFLIA)是基于時間分辨熒光分析法(Time-resolvedfluorometry，TRF)建立的微量免疫分析技術，其具體原理為：利用熒光發射體的熒光壽命差別，以鑭系元素銪(Eu³⁺)為示蹤劑，標記抗原或抗體，解離出來的銪(Eu³⁺)與特制的擴增液形成新的螯合物時，其熒光明顯增強且持久，在檢測時，用延遲測量的方法信號較紫外法更高，且不易受血清基質干擾，大大提高檢測靈敏度。

對于PEG-rhGH檢測，如何制備一種利用鑭系元素化學發光測定技術、且可檢測完成PEG-rhGH分子的試劑盒，是目前長效生長激素檢測亟待解決的問題之一。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了一種基于鑭系元素化學發光法長效生長激素免疫定量檢測試劑盒及其方法。該方法可檢測PEG-rhGH完整分子，特異性強，靈敏度高。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種基于鑭系元素化學發光法長效生長激素免疫定量檢測試劑盒，該試劑盒包括：

PEG抗體、微孔板，生物素標記的PEG-rhGH抗體工作液，鏈霉親和素標記的鑭系元素銪工作液，增強解離液，PEG-rhGH抗原標準品和質控品。

本發明檢測方法將抗PEG的抗體過量包被于微孔板上，向微孔板中加入待檢的PEG-rhGH與其反應，再加入生物素標記的PEG-rhGH抗體，結合解離增強鑭系熒光免疫分析法，檢測熒光信號，信號的強度與樣品中PEG-rhGH的量呈正相關。本發明利用解離增強鑭系熒光免疫分析技術進行長效生長激素定量檢測，檢測時，捕獲抗體為抗PEG的抗體，檢測抗體為抗GH的抗體，可檢測完整PEG-rhGH分子，同時避免了內源性GH干擾，可準確檢測體內長效生長激素代謝情況，或者體外長效生長激素的穩定性。

作為優選，PEG-rhGH標準品為在0.1～150ng/mL范圍內的一系列梯度濃度的標準品；

質控品為在2～100ng/mL范圍內的高、中、低濃度的質控品。