[發(fā)明專利]一種在大腸桿菌中表達的對苯二酚降解酶基因組及其應用

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• 申請日: 2020-11-09
• 公開（公告）號: CN112359046A
• 公開（公告）日: 2021-02-12
• 發(fā)明（設計）人: 許晶;田永生;王波;高建杰;王麗娟;李振軍;彭日荷;姚泉洪
• 申請（專利權）人: 上海市農業(yè)科學院
• 主分類號: C12N15/53
• 分類號: C12N15/53;C12N15/70;C12N1/21;B09C1/10;C02F3/34;C02F101/34;C12R1/19
• 代理公司: 上海開祺知識產權代理有限公司 31114
• 代理人: 張曉敏;費開逵

1.一種在大腸桿菌中表達的對苯二酚降解酶基因組，包括源于假單胞菌并按大腸桿菌的密碼子偏好性優(yōu)化后獲得的PnpCS、PnpDS和PnpES基因。

2.根據(jù)權利要求1所述的對苯二酚降解酶基因組，其特征在于，按大腸桿菌的密碼子偏好性優(yōu)化后，所述PnpCS基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；PnpDS基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；PnpES基因的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。

3.如權利要求1或2所述的對苯二酚降解酶基因組在大腸桿菌中的應用。

4.一種多基因大腸桿菌轉化載體，包括大腸桿菌表達載體，以及源于假單胞菌并按大腸桿菌的密碼子偏好性優(yōu)化后獲得的PnpCS、PnpDS和PnpES基因分別與T7啟動子和終止子融合的基因表達盒。

5.根據(jù)權利要求4所述的多基因大腸桿菌轉化載體，其特征在于，所述大腸桿菌表達載體為pET-28a。

6.一種可完全降解對苯二酚的轉基因大腸桿菌的獲得方法，包括以下步驟：

1)根據(jù)大腸桿菌的密碼子偏好性，對源于假單胞菌的PnpC基因、PnpD基因和PnpE基因按大腸桿菌表達模式優(yōu)化，優(yōu)化后分別獲得PnpCS基因、PnpDS基因和PnpES基因，利用重疊延伸PCR技術，將優(yōu)化后的三段基因分別與T7啟動子和終止子融合，構建基因表達盒；

2)將步驟1)中構建的三個基因表達盒依次按PnpCS、PnpDS和PnpES的順序連接入大腸桿菌表達載體，獲得三基因表達盒的多基因大腸桿菌轉化載體；

3)將步驟2)所述多基因大腸桿菌轉化載體轉入大腸桿菌，獲得可完全降解對苯二酚的大腸桿菌。

7.根據(jù)權利要求6所述的獲得方法，其特征在于，所述PnpCS基因的核苷酸序列如SEQID No.1所示；所述PnpDS基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；所述PnpES基因的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。

8.根據(jù)權利要求6或7所述的獲得方法，其特征在于，步驟1)中，所述T7啟動子的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；所述T7終止子序列如SEQ ID NO.5所示。

9.根據(jù)權利要求6或7所述的獲得方法，其特征在于，步驟2)中，所述大腸桿菌表達載體為pET-28a。

10.根據(jù)權利要求6所述的獲得方法，其特征在于，步驟3)中，所述大腸桿菌為BL21-AI。