[發(fā)明專(zhuān)利]檢測(cè)犬胰腺炎的熒光免疫層析試劑盒及其制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011238040.1
• 申請(qǐng)日: 2020-11-09
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112462069B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-11-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 梁才弗;王偉;楊晶
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 海衛(wèi)特（廣州）醫(yī)療科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/58
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/58;G01N33/577;G01N33/573;G01N33/558;G01N33/533
• 代理公司: 華進(jìn)聯(lián)合專(zhuān)利商標(biāo)代理有限公司 44224
• 代理人: 戴志攀

1.一種檢測(cè)犬胰腺炎的熒光免疫層析試劑盒，其特征在于，包括免疫層析試紙條和樣本稀釋液；

所述樣本稀釋液為含有0.5wt％～2wt％吐溫20、0.5wt％～2wt％聚乙烯吡咯烷酮40、0.001M～0.005M乙二胺四乙酸二鈉或乙二胺四乙酸二鉀、0.001wt％～0.005wt％防腐劑P300、0.2M～0.5M氯化鈉、0.1wt％～1.0wt％月桂基磷酸單酯鉀鹽和0.01wt％～1.0wt％脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸銨的緩沖液；

所述免疫層析試紙條包括底板和設(shè)于所述底板上的樣品墊、結(jié)合墊、反應(yīng)膜和吸水墊，所述結(jié)合墊的兩端分別與所述樣品墊及所述反應(yīng)膜搭接，所述反應(yīng)膜遠(yuǎn)離所述結(jié)合墊的一端與所述吸水墊搭接，所述反應(yīng)膜上設(shè)有相互間隔的檢測(cè)線(xiàn)及質(zhì)控線(xiàn)，所述檢測(cè)線(xiàn)較所述質(zhì)控線(xiàn)更靠近所述結(jié)合墊，所述結(jié)合墊上含有分別用熒光微球標(biāo)記的犬胰脂肪酶單克隆檢測(cè)抗體和第一質(zhì)控抗體，所述檢測(cè)線(xiàn)上包被有犬胰脂肪酶單克隆捕獲抗體，所述質(zhì)控線(xiàn)包被有能夠與所述第一質(zhì)控抗體特異性結(jié)合的第二質(zhì)控抗體。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的熒光免疫層析試劑盒，其特征在于，所述樣品墊上含有鼠IgG、伊文斯蘭、阻斷劑R-001、吐溫20和BSA。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的熒光免疫層析試劑盒，其特征在于，所述結(jié)合墊上還含有吐溫20、BSA和蔗糖。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的熒光免疫層析試劑盒，其特征在于，所述第一質(zhì)控抗體為羊抗兔IgG抗體，所述第二質(zhì)控抗體為兔IgG抗體。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的熒光免疫層析試劑盒，其特征在于，所述熒光微球?yàn)闊晒饽z乳微球。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的熒光免疫層析試劑盒，其特征在于，所述熒光微球的直徑為200mm～500nm，所述熒光微球在300nm～400nm的激發(fā)光光源作用下，發(fā)射出500nm～600nm的熒光。

7.一種權(quán)利要求1～6任一項(xiàng)所述的熒光免疫層析試劑盒的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

將所述吐溫20、聚乙烯吡咯烷酮40、乙二胺四乙酸二鈉、防腐劑P300、氯化鈉、月桂基磷酸單酯鉀鹽、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸銨和Tris鹽酸緩沖液混合得到所述樣本稀釋液；

將分別用熒光微球標(biāo)記的犬胰脂肪酶單克隆檢測(cè)抗體和第一質(zhì)控抗體包被在結(jié)合墊上；

將犬胰脂肪酶單克隆捕獲抗體包被在反應(yīng)膜上形成所述檢測(cè)線(xiàn)；

將第二質(zhì)控抗體包被在所述反應(yīng)膜上形成與所述檢測(cè)線(xiàn)相間隔的所述質(zhì)控線(xiàn)；

將所述樣品墊、所述吸水墊、所述結(jié)合墊及所述反應(yīng)膜設(shè)于所述底板上，得到所述免疫層析試紙條。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述樣品墊的制備方法包括以下步驟：制備含有0.5mg/mL～2mg/mL鼠IgG、0.5wt％～1wt％伊文斯蘭、0.1mg/mL～2mg/mL阻斷劑R-001、0.5wt％～3wt％吐溫20和2wt％～5wt％BSA的樣品墊稀釋液，并以2μL/cm～8μL/cm的噴涂量噴在玻璃纖維墊上。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述熒光微球標(biāo)記的犬胰脂肪酶單克隆檢測(cè)抗體的制備方法包括以下步驟：將熒光微球與活化緩沖液混合進(jìn)行活化，然后離心棄上清并加入終止液終止活化，收集活化后的熒光微球與犬胰脂肪酶單克隆檢測(cè)抗體混合孵育60min～120min，然后加入封閉液孵育30min～60min，離心棄上清后加入微球稀釋液。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的制備方法，其特征在于，所述活化緩沖液為含有5mg/mL～10mg/mL N-羥基琥珀酰亞胺和5mg/mL～10mg/mL 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽的Tris緩沖液；所述終止液為含有0.1wt％～0.5wt％甲醇的MES緩沖液；所述封閉液為含有0.5wt％～2wt％BSA的Tris緩沖液；所述微球稀釋液為含有0.5wt％～3wt％吐溫20、2wt％～5wt％BSA和3wt％～10wt％蔗糖的PBS緩沖液。