[發明專利]一種DNA樣本保存液及其制備方法與應用

在審

• 申請號: 202011237864.7
• 申請日: 2020-11-09
• 公開（公告）號: CN112322697A
• 公開（公告）日: 2021-02-05
• 發明（設計）人: 張惠丹
• 申請（專利權）人: 蘇州乾康基因有限公司
• 主分類號: C12Q1/24
• 分類號: C12Q1/24
• 代理公司: 南京利豐知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 32256
• 代理人: 王鋒

本發明公開了一種DNA樣本保存液及其制備方法與應用。所述DNA樣本保存液包括如下組分：弱堿1?10g/L、EDTA鹽0.1?5g/L、抗氧化劑0.1?1g/L、烷基硫酸鹽0.1?10w/v％、防腐劑0.1?5v/v％、硫醇類還原劑5?50mmol/L、聚乙二醇辛基苯基醚0.1?2v/v％，其余部分包括水。本發明制備的DNA樣本保存液組分簡單、含量少、制造成本低、容易批量生產和采樣，不會抑制后續的檢測分析；保存生物樣品的時間長，可長達1年之久；同時DNA樣本保存液獨有的配方通過有效的配比與之間的協同作用，保證樣品可以直擴，不會抑制下游的PCR反應。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種DNA樣本保存液及其制備方法與應用。

背景技術

現有技術中，口腔DNA樣本的采集主要采用棉簽拭子獲取口腔黏膜上皮細胞的方式來進行。口腔拭子采集的樣本中，除脫落的上皮細胞外，還含有大量細菌、DNA酶、RNA酶、粘蛋白、球蛋白、消化酶和白蛋白等各類消化相關物質。若拭子樣本直接常溫下放置較長一段時間，黏附的多種有機物的存在容易滋生大量微生物，細菌在25℃及以上的溫度環境中，繁殖迅速，且在DNA酶的分解下，DNA迅速降解。這個過程增加樣本污染和DNA降解的風險，從而影響后續檢測和分析。

通過把采集的口腔拭子置于相應的拭子保存液中可以大大增加樣本保存過程中的穩定性，延緩樣本DNA的降解。已有口腔拭子保存液專利中，其保護劑成分大多較為復雜：專利CN102440234A和CN105368812A中分別含有強蛋白質變性劑異硫氰酸胍和尿素，雖然可以將口腔中的消化酶、核酸酶等有機物質進行變性處理，抑制核酸酶的活性，但同時也會對裂解細胞，使得DNA處于游離狀態，不利于DNA的完整性保存；專利CN102919218A中含有氯化鎂，鎂離子是核酸酶激活劑，容易引起DNA的降解，不利于DNA的穩定性和完整性的保存；專利CN102676501A和CN105039306A中含有微生物生長所需的糖成分，雖然可以很好地保持該保存液中細胞的滲透壓，但更容易引起細菌等微生物的滋生；專利CN111139235A中含有氯化鈉和蛋白酶K，采集的樣本需要提取過硅膠吸附柱、磁珠吸附等，操作較繁瑣；專利CN109691432A中含有氯化鈉維持細胞的滲透壓，主要便于細胞的保存和運輸，可以保護基因組在數周內不被破壞，保存樣本的時間較短；專利公布號CN111183973A中含有尿素、褐藻酸鈉和左旋肉堿，成分較復雜，同時采集的樣本也需要提取，操作較繁瑣。以此，開發一種簡單、有效的保存DNA樣本的保存液是亟待解決的問題。

發明內容

本發明的主要目的在于提供一種DNA樣本保存液及其制備方法與應用，以克服現有技術的不足。

為實現前述發明目的，本發明采用的技術方案包括：

本發明實施例提供了一種DNA樣本保存液，其包括如下組分：弱堿1-10g/L、EDTA鹽0.1-5g/L、抗氧化劑0.1-1g/L、烷基硫酸鹽0.1-10w/v％、防腐劑0.1-5v/v％、硫醇類還原劑5-50mmol/L、聚乙二醇辛基苯基醚0.1-2v/v％，其余部分包括水；其中，所述弱堿包括有機弱堿和/或無機弱堿；所述有機弱堿包括三羥甲基氨基甲烷、乙醇胺、三乙醇胺、甘氨酸、有機酸堿金屬鹽中的任意一種或兩種以上的組合，且不限于此；所述無機弱堿包括堿金屬的碳酸鹽、碳酸氫鹽、磷酸鹽、硼酸鹽中的任意一種或兩種以上的組合，且不限于此；所述抗氧劑包括尿酸、尿酸鹽、丁基羥基茴香醚(BHA)、二丁基羥基甲苯(BHT)、沒食子酸丙酯(PG)中的任意一種或兩種以上的組合，且不限于此，優選為尿酸和/或尿酸鹽；所述硫醇類還原劑包括三(2-羧乙基)膦(TCEP)。

本發明實施例還提供了前述的DNA樣本保存液的制備方法，其包括：

將弱堿、EDTA鹽、抗氧化劑、烷基硫酸鹽、防腐劑與水混合形成溶液，之后向所獲溶液中加入硫醇類還原劑、聚乙二醇辛基苯基醚、水混合均勻，形成所述DNA樣本保存液。

本發明實施例還提供了前述的DNA樣本保存液于保存DNA樣本中的用途。