[發(fā)明專(zhuān)利]強(qiáng)化表達(dá)yvbW基因在提高解淀粉芽胞桿菌吲哚乙酸產(chǎn)量中的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011237251.3
• 申請(qǐng)日: 2020-11-09
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112359004B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-07-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳守文;佘夢(mèng)林;蔡冬波;高林;楊之帆;熊敏;王衛(wèi)民;黃廣華
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 湖北大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N1/21
• 分類(lèi)號(hào): C12N1/21;C12N9/00;C12N15/52;C12N15/75;C12N15/66;C12P17/10;C12R1/07
• 代理公司: 武漢宇晨專(zhuān)利事務(wù)所(普通合伙) 42001
• 代理人: 龔瑩瑩

1.強(qiáng)化表達(dá)yvbW基因在提高解淀粉芽胞桿菌吲哚乙酸產(chǎn)量中的應(yīng)用，所述的yvbW基因的核苷酸序列為SEQ ID NO.1所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，所述的解淀粉芽孢桿菌為代謝 產(chǎn)物中有吲哚乙酸的解淀粉芽孢桿菌。

3.權(quán)利要求1所述的應(yīng)用中的解淀粉芽孢桿菌的保藏編號(hào)為CCTCC NO：M2015234。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，所述的應(yīng)用過(guò)程為：

（1）以地衣芽胞桿菌DW2基因組DNA為模板，PCR擴(kuò)增出yvbW基因片段；

（2）通過(guò)重疊延伸PCR將P43啟動(dòng)子、yvbW基因和淀粉酶終止子連接到一起，構(gòu)成目的基因表達(dá)框，該目的基因表達(dá)框的排列順序?yàn)椋篜43啟動(dòng)子-yvbW基因-淀粉酶終止子；

（3）采用SacI和XbaI限制性?xún)?nèi)切酶對(duì)目的基因表達(dá)框進(jìn)行雙酶切，得到酶切后的基因表達(dá)框；

（4）準(zhǔn)備質(zhì)粒pHY-300，同樣采用SacI和XbaI限制性?xún)?nèi)切酶對(duì)質(zhì)粒pHY-300進(jìn)行雙酶切，得到線(xiàn)性質(zhì)粒片段；

（5）將步驟（3）得到的酶切基因表達(dá)框和步驟（4）得到的線(xiàn)性質(zhì)粒片段經(jīng)DNA 連接酶連接，得到yvbW游離表達(dá)質(zhì)粒pHY-yvbW；

（6）將yvbW游離表達(dá)質(zhì)粒pHY-yvbW轉(zhuǎn)入大腸桿菌DH5α中，以四環(huán)素抗性作為篩選標(biāo)記，篩選得到陽(yáng)性轉(zhuǎn)化子，并進(jìn)行菌落PCR驗(yàn)證，抽取驗(yàn)證成功的陽(yáng)性轉(zhuǎn)化子的質(zhì)粒電轉(zhuǎn)化到解淀粉芽胞桿菌LX-12中，以四環(huán)素抗性作為篩選標(biāo)記，篩選得到陽(yáng)性轉(zhuǎn)化子，進(jìn)行菌落PCR檢測(cè)，得到yvbW基因表達(dá)強(qiáng)化的解淀粉芽胞桿菌LX-12/pHY-yvbW菌株。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，在應(yīng)用過(guò)程中是以強(qiáng)化表達(dá)yvbW基因的解淀粉芽胞桿菌菌株發(fā)酵生產(chǎn)吲哚乙酸時(shí)，其發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：15-25g/L葡萄糖；4-6g/L L-谷氨酸鈉；0.5-1g/L L-色氨酸；0.5-1.5 g/L 酵母粉；0.5-1.5 g/LKH₂PO₄；0.5-1 g/L KCl和0.5-1 g/LMgSO₄·7H₂O，pH7.00-7.20，其余為水。