[發(fā)明專利]一種檢測腫瘤轉(zhuǎn)移種子細(xì)胞的免疫組化染色試劑盒及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011237078.7
• 申請日: 2020-11-09
• 公開（公告）號: CN114280303A
• 公開（公告）日: 2022-04-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 付麗;時倩倩;李貴波;李帥;賈宏琴;王鶴髯;谷峰
• 申請（專利權(quán)）人: 天津市腫瘤醫(yī)院（天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院）
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577;G01N33/574;G01N33/573
• 代理公司: 天津市宗欣專利商標(biāo)代理有限公司 12103
• 代理人: 董光仁

本發(fā)明公開了一種用于檢測腫瘤轉(zhuǎn)移種子細(xì)胞的免疫組化染色試劑盒及其應(yīng)用，屬用于癌癥的免疫化學(xué)實驗物質(zhì)的制備。該試劑盒主要包括抑癌分子PRDM16、IGSF9和腫瘤干性分子ALDH2的三種蛋白免疫組化抗體，用于檢測來自受試者的離體腫瘤組織中以上三個分子的蛋白表達水平。本發(fā)明根據(jù)三個分子相應(yīng)蛋白的表達水平，用于測定腫瘤轉(zhuǎn)移種子細(xì)胞，即PRDM16和IGSF9蛋白低/失表達、ALDH2蛋白高表達的腫瘤轉(zhuǎn)移種子細(xì)胞，為臨床精準(zhǔn)治療方案的制定及患者的預(yù)后預(yù)測提供依據(jù)，具有廣闊的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及用于癌癥的免疫化學(xué)實驗物質(zhì)的制備，具體是一種檢測腫瘤轉(zhuǎn)移種子細(xì)胞的免疫組化染色試劑盒及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

惡性腫瘤已成為危害人類健康最嚴(yán)重的疾病之一。其死亡率僅次于心血管系統(tǒng)疾病位居第二位，并呈逐年上升的趨勢，耗費大量的醫(yī)療資源。腫瘤的轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致患者死亡的直接原因，但如何能將具有轉(zhuǎn)移能力的腫瘤細(xì)胞(即腫瘤轉(zhuǎn)移種子細(xì)胞)診斷出來并指導(dǎo)精準(zhǔn)治療目前還是空白，迫切需要研究解決。

PR域基因家族成員16(PR domain 16,PRDM16)基因在2003年首次被發(fā)現(xiàn)，是PR域基因家族中的一員，編碼的蛋白是一種鋅指轉(zhuǎn)錄因子，包含N端PR結(jié)構(gòu)域。PRDM16參與骨骼成肌細(xì)胞與棕色脂肪細(xì)胞之間的轉(zhuǎn)換，進而促進產(chǎn)熱和線粒體功能。PRDM16在不同類型腫瘤中表達水平不同，發(fā)揮的作用也不同，在肺癌中可能作為抑癌基因，在急性髓系白血病、膠質(zhì)瘤、胃癌、直腸癌中可能為致癌基因。PRDM16表達水平與基因的啟動子甲基化狀態(tài)高度相關(guān)，啟動子低甲基化時PRDM16高表達，高甲基化狀態(tài)下則表達水平下調(diào)。

免疫球蛋白超家族成員9(Immunoglobulin superfamily member 9,IGSF9)位于1q23.2處，與果蠅基因turtle同源，并于2002年在人體中報道了此基因的存在。IGSF9是免疫球蛋白超家族的一員，介導(dǎo)同類及異類細(xì)胞間的粘附作用。IGSF9參與鼠神經(jīng)系統(tǒng)樹突形成、突觸成熟和突觸傳導(dǎo)。IGSF9與腫瘤的關(guān)系報道不一：在子宮內(nèi)膜癌中IGSF9上調(diào)，且IGSF9過表達的子宮內(nèi)膜癌患者其腫瘤侵襲能力強，病人預(yù)后差。與正常輸卵管組織相比，高級別漿液性卵巢癌IGSF9上調(diào)約5-9倍。與正常膽囊組織相比，IGSF9是膽囊癌中表達最強的基因之一(約18倍)。而在黑色素瘤、家族性腺瘤性息肉病和腺瘤病中表達下調(diào)。

醛脫氫酶(Aldehyde dehydrogenase，ALDH)超家族是NAD(P)+依賴的酶，且是一類發(fā)揮多功能作用的蛋白。目前為止在人的基因組中發(fā)現(xiàn)至少有19個ALDH基因。主要位于線粒體、細(xì)胞液和細(xì)胞質(zhì)微粒體中。醛脫氫酶家族成員2(Aldehyde dehydrogenase 2familymember，ALDH2)是ALDH家族中的一員，位于線粒體基質(zhì)內(nèi)，負(fù)責(zé)催化乙醛氧化為乙酸的反應(yīng)，在體內(nèi)乙醇代謝過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。ALDH2還能有效促進除乙醛外其它短鏈脂肪族醛和芳香族醛的氧化。在人體多組織中均有表達，最常見于肝臟和皮下脂肪組織，與酒精性肝病的發(fā)生密切相關(guān)。ALDH2在維持癌細(xì)胞干性和介導(dǎo)微管抑制劑抗性中起關(guān)鍵作用。白血病細(xì)胞和肺癌細(xì)胞中過表達ALDH2可促進細(xì)胞增殖和克隆形成能力，并增加對阿霉素的耐藥性。

截止目前，PRDM16、IGSF9和ALDH2在乳腺癌等惡性腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移機制中發(fā)揮的作用未見報道。而且，尚未有鑒定(篩選)腫瘤轉(zhuǎn)移種子細(xì)胞的試劑盒。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明就是為了解決腫瘤轉(zhuǎn)移種子細(xì)胞的診斷問題，而提供一種檢測腫瘤轉(zhuǎn)移種子細(xì)胞的免疫組化染色試劑盒及其應(yīng)用。

鑒于PRDM16編碼的蛋白是一種鋅指轉(zhuǎn)錄因子，該蛋白家族參與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，控制細(xì)胞增殖、分化和凋亡。在高轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞不表達或低表達。IGSF9是免疫球蛋白超家族的一員，介導(dǎo)同類及異類細(xì)胞間的黏附作用。在高轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞不表達或低表達。ALDH2位于線粒體基質(zhì)內(nèi)，在維持癌細(xì)胞干性和介導(dǎo)微管抑制劑抗性中起關(guān)鍵作用，ALDH2在高轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞高表達。