[發明專利]一種堿性成纖維細胞生長因子微球及其制備方法

在審

• 申請號: 202011235414.4
• 申請日: 2020-11-06
• 公開（公告）號: CN114522220A
• 公開（公告）日: 2022-05-24
• 發明（設計）人: 曲柯潤;楊波;方海洲;王振恒;薛琦;戴佩旻
• 申請（專利權）人: 珠海億勝生物制藥有限公司
• 主分類號: A61K38/18
• 分類號: A61K38/18;A61K9/52;A61K47/34;A61P17/02
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 李進;李志強

1.一種制備微球的方法，包括以下步驟：

提供有機相，所述有機相包含溶解于有機溶劑中的聚己內酯和任選的有機相表面活性劑；優選地，聚己內酯的相對分子量為50,000～70,000，例如55,000；優選地，聚己內酯的質量百分比為2％～10％；優選地，有機相表面活性劑的體積百分比為0.2％～4.0％；優選地，通過將聚己內酯和任選的有機相表面活性劑加入有機溶劑中，靜置溶解過夜，得到有機相；

提供外水相，所述外水相包含溶解于水中的外水相表面活性劑；

提供內水相，所述內水相包含溶解于水中的堿性成纖維細胞生長因子和任選的內水相表面活性劑；優選地，所述堿性成纖維細胞生長因子的質量百分比為0.0000005％～0.50％，例如0.05％-0.50％；

由內水相和有機相得到油包水初乳；優選地，所述內水相和有機相的體積比為1∶5～1∶20；

由油包水初乳和外水相得到水包油包水復乳；優選地，所述有機相和外水相的體積比為1∶5～1∶20；

使復乳中的有機溶劑揮發，得到微球；以及

收集微球。

2.根據權利要求1所述的方法，其中所述有機相表面活性劑選自司盤-80、聚甘油油酸酯、硬脂酸甘油酯。

3.根據權利要求1所述的方法，其中所述有機溶劑選自二氯甲烷、三氯甲烷或四氫呋喃。

4.根據權利要求1所述的方法，其中所述外水相表面活性劑選自吐溫-80、PVA、聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基纖維素鈉；優選地，所述外水相表面活性劑是質量百分比為0.5％～5.0％的PVA和/或體積百分比為0.0001％～1％的吐溫-80。

5.根據權利要求1所述的方法，其中所述外水相還包含滲透壓調節劑(例如NaCl)或pH緩沖劑(例如磷酸鹽或碳酸鹽)；優選地，滲透壓調節劑的質量百分比為0～7％；優選地，pH值為6.0～8.0；優選地，所述外水相通過在60～90℃持續攪拌15～90分鐘后，靜置冷卻至室溫后得到；優選地，所述外水相在緩沖體系(例如磷酸鹽緩沖液、碳酸鹽緩沖液和磷酸緩沖鹽溶液中的一種)中制備。

6.根據權利要求1所述的方法，其中所述內水相表面活性劑選自PVA、吐溫、司盤；優選地，所述內水相表面活性劑是質量百分比為0～4％的PVA；優選地，通過將PVA加至堿性成纖維細胞生長因子水溶液中，靜置溶解后得到內水相。

7.根據權利要求1所述的方法，其中通過在攪拌下將內水相在有機相液面上方以一定速率(例如0.5～2.0ml/min)滴加至有機相中，任選地在滴加結束后優選以相同轉速(例如1000-3000rpm，例如2500rpm)繼續攪拌例如0～1.5min，得到油包水初乳。

8.根據權利要求1所述的方法，其中通過在攪拌下將油包水初乳在外水相液面下方以一定速率(例如0.5～2.0ml/min)加至外水相中，任選地在滴加結束后優選以相同轉速(例如1000-3000rpm，例如2,500rpm)繼續攪拌例如0～1.5min，得到水包油包水復乳，任選調節轉速(例如600～1200rpm)，繼續攪拌(例如6～24h)使有機溶劑揮發，得到微球。

9.根據權利要求1所述的方法，其中通過離心后(例如3000-10000rpm，例如6500rpm)棄去上清液收集微球，任選清洗微球(例如用注射用水清洗)，任選將微球用水分散后凍干；優選地，所述凍干過程包括：以-0.25～-1.00℃/min的降溫速率將微球分散液從室溫冷凍至-30℃，并在-30℃維持120min；待所述冷凍結束后，調整真空度至200～300μBar，將溫度從-30℃階段式升溫至-25℃、-20℃、-15℃，其中各階段升溫速率為+0.08～0.17℃/min、維持時間為60～180min；待一次升華結束后，調整真空度至150μB、溫度至-15℃，持續120～180min；待二次升華結束后，得到干燥的微球。

10.一種微球，包括外殼和內核，所述外殼包含聚己內酯，所述內核包含堿性成纖維細胞生長因子。