[發明專利]一種定量檢測血清中抗人白介素17單克隆抗體含量的酶聯免疫分析方法

有效

• 申請號: 202011233020.5
• 申請日: 2020-11-06
• 公開（公告）號: CN112300285B
• 公開（公告）日: 2022-08-02
• 發明（設計）人: 陳濤;孫秋萍;孔永;陳衛;朱云;錢偉倫;徐蕾
• 申請（專利權）人: 江蘇荃信生物醫藥股份有限公司
• 主分類號: C07K16/42
• 分類號: C07K16/42;G01N33/577;G01N33/58
• 代理公司: 北京唐頌永信知識產權代理有限公司 11755
• 代理人: 劉偉;王維

一種定量檢測血清中抗人白介素17單克隆抗體含量的酶聯免疫分析方法。本申請涉及一種抗體；它的重鏈、輕鏈；相應的可變域以及相應的互補決定域；以及在BA?ELISA分析中使用該抗體作為二抗所建立的酶聯免疫分析方法。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，尤其涉及一種定量檢測血清中抗人白介素17 單克隆抗體含量的酶聯免疫分析方法。

背景技術

白介素17(IL-17)也稱為CTLA-8或IL-17A，是促炎細胞因子，其刺激諸如成纖維細胞、角質細胞、上皮和內皮細胞、滑膜細胞等非免疫細胞分泌 IL-6、IL-8、PGE2、MCP-1、CXCL-1和G-CSF等多種細胞因子，并且還具有誘導ICAM-1表面表達、T細胞增殖等生物學效應。IL-17A主要由一類激活的稱之為Th17的CD4+T細胞產生并通過結合IL-17RA和IL-17RC的復合物而發揮作用(Toy等，2006，J.Immunol.177(11)；36-39)。抗人白介素 17單克隆抗體為特異性結合人白細胞介素17A(IL-17A)的IgG1κ型人源化單克隆抗體；其親本抗體由經人IL-17A免疫的新西蘭兔B細胞篩選獲得，親本兔抗經人源化改造后得到抗人白介素17單克隆抗體。

本申請中待檢測的抗人白介素17單克隆抗體是江蘇荃信生物醫藥有限公司的QX002N，該抗人白介素17單克隆抗體在中國專利文獻CN 108640991 B中有所描述。具體來說，過高表達的IL-17A可引起諸多炎癥疾病：如IL-17A作用于巨噬細胞，DC細胞，誘發IL-1，IL-6，TNF，CRP 的高表達，導致炎癥反應，參與銀屑病和移植排斥的病理過程；IL-17A作用于內皮細胞，誘發IL-6，MMP，凝血因子的高表達，導致血管活化，參與再灌注損傷、血栓和動脈粥樣硬化的病理過程；IL-17A作用于成纖維細胞，誘發IL-6，趨化因子，生長因子，MMP的高表達，導致基質破壞，參與多發性硬化癥、克羅恩病的病理過程；IL-17A作用于成骨細胞和軟骨細胞，誘導RANKL、MMP、破骨細胞生成、導致骨侵蝕、軟骨損傷，參與風濕性關節炎、牙周病的病理過程(N Engl J Med.2009Aug27；361(9):888-98.Nat Rev DrugDiscov.2012Oct；11(10):763-76.Semin Arthritis Rheum.2013Oct；43 (2):158-70.Trends Mol Med.2016Mar；22(3):230-41.)。IL-17A中和抗體可以抑制自身免疫性疾病患者體內高表達IL-17A，并降低重要炎癥因子IL-6的產生(Chabaud M,Durand JM,BuchsN,et al.Arthritis Rheum.1999,42: 963-70)。很多自身免疫疾病的動物模型實驗證明，使用抗體中和IL-17A，可有效抑制炎癥的病理發展(Lubberts E,Koenders MI,Oppers-Walgreen B,et al.Arthritis Rheum.,2004,50:650-659)。目前，IL-17A相關抗體藥物已經被批準上市，分別是Secukinumab(IL-17A靶向抗體，SEC)用于治療斑塊銀屑病、強直性脊柱炎及銀屑病關節炎、Ixekizumab(IL-17A靶向抗體，IXE)，用于治療斑塊銀屑病及銀屑病關節炎。江蘇荃信生物醫藥有限公司開發了商品代號為QX002N的抗IL-17單克隆抗體作為藥物使用。

對于藥物而言，藥代動力學是應用動力學原理與數學處理方法，定量描述藥物在體內的動態變化規律，研究通過各種途徑進入人體的藥物，其吸收、分布、代謝、排泄的過程。因此藥代動力學的研究將有利于評價藥物的安全性和有效性。生物樣品常用的分析方法包括色譜法和免疫法。色譜法靈敏度較低，試驗過程繁瑣，回收率不穩定。免疫法是以特異性抗原-抗體反應為基礎的分析方法，是當前臨床和非臨床生物樣品檢測方法中最為常用的一種，由于抗人白介素17單克隆抗體是蛋白大分子，適合使用酶聯免疫分析方法進行測定，而且生物素化兔抗抗人白介素17單克隆抗體作為第二抗體與檢測抗體的結合使用，減少血清中無關蛋白的干擾。