[發明專利]與栽培種來源抗桃綠蚜性狀緊密連鎖的分子標記、引物、應用及品種選育方法

有效

• 申請號: 202011231906.6
• 申請日: 2020-11-06
• 公開（公告）號: CN112195268B
• 公開（公告）日: 2022-08-19
• 發明（設計）人: 潘磊;王志強;牛良;魯振華;曾文芳;崔國朝;閆樂樂
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院鄭州果樹研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 鄭州睿信知識產權代理有限公司 41119
• 代理人: 牛愛周

1.一種與栽培種來源抗桃綠蚜性狀緊密連鎖的分子標記，其特征在于，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的5’端起第72-91位的插入或缺失。

2.如權利要求1所述的分子標記在桃抗蚜品種選育中的應用。

3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，對權利要求1所述的分子標記的基因型進行檢測，當SEQ ID NO.1所示序列的5’端起第72-91位為插入純合基因型時，待測樣本為感蚜性狀；當SEQ ID NO.1所示序列的5’端起第72-91位為缺失純合基因型時，待測樣本為抗蚜性狀；當SEQ ID NO.1所示序列的5’端起第72-91位為插入或缺失雜合基因型時，待測樣本為抗蚜性狀。

4.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，通過PCR擴增檢測SEQ ID NO.1所示序列5’端起第72-91位插入或缺失，所述PCR擴增采用引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2及SEQ IDNO.3所示。

5.用于檢測權利要求1所述分子標記的引物，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ IDNO.2及SEQ ID NO.3所示。

6.一種桃抗蚜品種選育方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)將栽培種來源的桃綠蚜抗性品種作為親本或親本之一進行雜交育種；

2)提取獲得的雜交后代基因組DNA作為待測樣本；

3)以基因組DNA為模板，對覆蓋權利要求1所述分子標記的區域設計引物并進行PCR擴增；

4)根據PCR擴增產物的基因型判定待測樣本抗蚜性狀并篩選出抗蚜單株：當SEQ IDNO.1所示序列的5’端起第72-91位為插入純合基因型時，待測樣本為感蚜性狀；當SEQ IDNO.1所示序列的5’端起第72-91位為缺失純合基因型時，待測樣本為抗蚜性狀；當SEQ IDNO.1所示序列的5’端起第72-91位為插入或缺失雜合基因型時，待測樣本為抗蚜性狀。

7.根據權利要求6所述的桃抗蚜品種選育方法，其特征在于，所述步驟2)中PCR擴增采用引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2及SEQ ID NO.3所示。

8.根據權利要求7所述的桃抗蚜品種選育方法，其特征在于，所述步驟2)中PCR擴增的反應體系如下：10×PCR Buffer 5μL，dNTP Mixture 1μL，Mg²⁺4μL，上游引物1μL，下游引物1μL，50ng/μl基因組DNA 2μL，DNA Polymerase 0.5μL，滅菌水35.5μL，總體積50μL；下游引物和上游引物在反應體系中的終濃度均為0.2μM。

9.根據權利要求8所述的桃抗蚜品種選育方法，其特征在于，所述PCR擴增的反應程序如下：預變性95℃，3min；進入PCR擴增循環，每個循環依次經過98℃，30s變性，57℃，30s復性，72℃，30s延伸，共循環38次，最后72℃，7min，完成PCR的擴增。

10.根據權利要求6所述的桃抗蚜品種選育方法，其特征在于，所述步驟4)中通過聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測PCR擴增產物條帶大小，以判斷SEQ ID NO.1所示序列的5’端起第72-91位是否缺失。