[發明專利]一種嗜堿性粒細胞脫顆粒檢測試劑盒、檢測方法及其應用

在審

• 申請號: 202011229350.7
• 申請日: 2020-11-06
• 公開（公告）號: CN112415181A
• 公開（公告）日: 2021-02-26
• 發明（設計）人: 紀方興;常麗青;王珊;謝敏
• 申請（專利權）人: 鄭州人福博賽生物技術有限責任公司;宜昌人福藥業有限責任公司;北京嘉德利康醫療科技有限公司
• 主分類號: G01N33/50
• 分類號: G01N33/50;G01N15/14
• 代理公司: 鄭州浩翔專利代理事務所(特殊普通合伙) 41149
• 代理人: 李偉

1.一種嗜堿性粒細胞脫顆粒檢測試劑盒，其特征在于，包括刺激緩沖液、刺激質控A、刺激質控B、染色試劑、溶解試劑和清洗緩沖液；所述刺激緩沖液包括鈣離子、肝素和白介素3；所述刺激質控A為抗高親和性IgE受體的單克隆抗體；所述刺激質控B為fMLP；所述染色試劑為anti-CD63-FITC和anti-CCR3-PE的混合物。

2.根據權利要求1所述的嗜堿性粒細胞脫顆粒檢測試劑盒，其特征在于，所述溶解試劑為NH₄Cl、KHCO₃或Na₂EDTA的10倍濃縮液。

3.根據權利要求1所述的嗜堿性粒細胞脫顆粒檢測試劑盒，其特征在于，所述刺激緩沖液、刺激質控A和刺激質控B均為凍干粉，所述染色試劑為2.2mL，所述溶解試劑為25mL。

4.一種權利要求1所述的嗜堿性粒細胞脫顆粒檢測試劑盒的應用，其特征在于，所述試劑盒用于速發型過敏反應的體外檢測和引起超敏反應的可疑過敏原檢測。

5.一種權利要求1所述的嗜堿性粒細胞脫顆粒檢測試劑盒的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）樣本的采集：將靜脈采血管顛倒數次，混勻抗凝血樣；

（2）標記試管：對于每個患者，分別在每個試管上進行標記，

其中：PB = 患者背景；

PC1 = 抗高親和性IgE受體的單克隆抗體刺激質控；

PC2 = fMLP刺激質控；

Ax-y=過敏原；

（3）細胞刺激：在每個患者標記好的試管中分別加入試劑盒中的刺激物；

PB試管中加入50μL刺激緩沖液，作為檢測背景，

PC1試管中加入50μL刺激質控A，

PC2試管中加入50μL 的刺激質控B，

Ax-y試管中加入50μL過敏原溶液；

然后，在上述每個試管中分別加入100μL刺激緩沖液和50μL患者全血樣本，輕柔混合；

（4）染色：向上述試管中分別加入20μL的染色試劑，輕柔混合，蓋上管蓋，37℃下水浴孵育15分鐘；

（5）溶解：在步驟（4）的每個試管中分別加入2mL溶解試劑，輕柔混合；然后在離心機內離心5分鐘，去除上清液，并用吸水紙進行吸干處理，之后用清洗緩沖液重懸細胞，輕柔渦旋，得到細胞混懸液；

（6）檢測：對步驟（5）所得的細胞混懸液采用流式細胞儀進行檢測。

6.根據權利要求5所述的嗜堿性粒細胞脫顆粒檢測試劑盒的檢測方法，其特征在于，步驟（1）中血樣的保存：對于蛋白質過敏原的檢測，血樣采集后需要立即進行細胞刺激或者在2-8℃下最多保存48小時；對于藥物和化學過敏原的檢查，采集后的血樣在2-8℃下最多保存24小時。

7.根據權利要求5所述的嗜堿性粒細胞脫顆粒檢測試劑盒的檢測方法，其特征在于，步驟（5）中的溶解試劑需要預熱至18-28℃。

8.根據權利要求5所述的嗜堿性粒細胞脫顆粒檢測試劑盒的檢測方法，其特征在于，步驟（5）中離心機的離心力為500xg。

9.根據權利要求5所述的嗜堿性粒細胞脫顆粒檢測試劑盒的檢測方法，其特征在于，步驟（5）中清洗緩沖液為300μL。

10.根據權利要求5所述的嗜堿性粒細胞脫顆粒檢測試劑盒的檢測方法，其特征在于，步驟（6）中的細胞混懸液需要在避光2-8℃下進行保存。