[發明專利]一種L-丙氨酸異丙酯鹽酸鹽與其對映異構體的分離方法

有效

• 申請號: 202011228567.6
• 申請日: 2020-11-06
• 公開（公告）號: CN112630314B
• 公開（公告）日: 2022-10-28
• 發明（設計）人: 張洪飛;郭賽;尚金鳳;廖正華
• 申請（專利權）人: 天地恒一制藥股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/54;G01N30/74
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本發明公開了一種L?丙氨酸異丙酯鹽酸鹽與其對映異構體的分離方法，所述分離方法包括在堿性條件下，使用GITC溶液對L?丙氨酸異丙酯鹽酸鹽及其異構體進行衍生化，衍生化后的L?丙氨酸異丙酯鹽酸鹽及其異構體采用HPLC色譜法進行分離和檢測。該分離方法能夠有效的分離L丙氨酸異丙酯鹽酸鹽和其對映異構體D?丙氨酸異丙酯鹽酸鹽，并能夠準確的測定其對映異構體的含量。本方法采用特定的反相方法和等度洗脫方式，簡單且易于操作，峰型較好，分離度合格，方法學驗證顯示本方法專屬性強，靈敏度高，準確度以及線性均比較良好。

技術領域

本發明涉及藥物檢測分析領域，更具體地，涉及一種L-丙氨酸異丙酯鹽酸鹽與其對映異構體的分離方法。

背景技術

L-丙氨酸異丙酯鹽酸鹽是一種重要的醫藥中間體，也是合成替諾福韋艾拉酚胺等原料藥的一種重要起始原料，其結構中具有一個手性中心。當以L-丙氨酸異丙酯鹽酸鹽為起始原料合成替諾福韋艾拉酚胺等原料藥時，其對映異構體D-丙氨酸異丙酯鹽酸鹽可能也會參與反應，生成原料藥相應的異構體雜質，例如D-丙氨酸異丙酯鹽酸鹽則是替諾福韋艾拉酚胺手性雜質的來源之一。因此，對物料雜質的研究有助于藥物的合成工藝優化和質量控制，研究L-丙氨酸異丙酯鹽酸鹽與其對映異構體D-丙氨酸異丙酯鹽酸鹽的分離檢測方法，可為評價L-丙氨酸異丙酯鹽酸鹽的質量提供較好的參考，也為優化L-丙氨酸異丙酯鹽酸鹽合成工藝提供技術依據，對確定L-丙氨酸異丙酯鹽酸鹽中D-丙氨酸異丙酯鹽酸鹽對映異構體所引起的不良反應具有重大意義。

經查閱文獻可知，目前關于L-丙氨酸異丙酯鹽酸鹽與其對映異構體D-丙氨酸異丙酯鹽酸鹽的分離方法研究報道非常少。如陳楠等人(陳楠,等.高效液相色譜法分離檢測L-丙氨酸異丙酯鹽酸鹽的對映異構體雜質[J].中南藥學,2020,(06):997-997)公開了采用高效液相色譜法分離檢測L-丙氨酸異丙酯鹽酸鹽的對映異構體雜質，該方法以鄰苯二甲醛/N-乙酰-L-半胱氨酸(OPA/NAC)對L-丙氨酸異丙酯鹽酸鹽及其異構體進行手性衍生化，生成具有紫外吸收的一對非對映異構體衍生物(波長為333nm)，經5-氟苯基色譜柱分離，采用0.1％三氟乙酸水溶液-甲醇的流動相體系進行梯度洗脫。然而，該方法對于色譜柱的要求苛刻，對柱前衍生前的衍生反應時間也限制嚴格，檢測成本偏高；且衍生化反應產物的穩定性時間較短，僅為2.5h，極有可能會影響實驗結果的準確性；這些無疑都不利應用于L-丙氨酸異丙酯鹽酸鹽對映異構體的拆分。

專利CN110849980A公開了一種檢測L-丙氨酸異丙酯鹽酸鹽及其對映異構體的檢測方法，該方法中的色譜柱填充劑為冠醚手性柱(硅膠表面涂敷有手性冠醚)，且需要使用強酸性流動相，例如pH值為1.0～2.0的高氯酸水溶液，對色譜柱的損害較大，而且檢測過程對溫度的要求過于嚴苛。

本發明為解決L-丙氨酸異丙酯鹽酸鹽異構體與其對映異構體難分離問題，提供了一種便捷、高效、準確的分離方法。

發明內容

本發明的目的是克服上述現有技術中的缺陷和不足，提供一種L-丙氨酸異丙酯鹽酸鹽與其對映異構體的分離方法，該方法在堿性條件下采用GITC溶液對L-丙氨酸異丙酯鹽酸鹽進行柱前衍生化，并結合特定的HPLC檢測條件，從而實現L-丙氨酸異丙酯鹽酸鹽與其對映異構體D-丙氨酸異丙酯鹽酸鹽的分離與測定，并使該方法在系統適用性、專屬性、線性和范圍等方面完全符合中國藥典方法驗證的指導原則，可用于以L-丙氨酸異丙酯鹽酸鹽為起始原料或中間體制得的原料藥或藥品的質量控制。

本發明上述目的通過以下技術方案實現：

一種L-丙氨酸異丙酯鹽酸鹽與其對映異構體的分離方法，所述分離方法包括在堿性溶液的存在下，使用乙酰葡萄糖異硫氰酸酯(GITC)溶液對L-丙氨酸異丙酯鹽酸鹽及其異構體進行衍生化，衍生化后的L-丙氨酸異丙酯鹽酸鹽及其異構體采用HPLC色譜法得到分離和檢測。

優選地，所述堿性溶液為三乙胺溶液。

優選地，所述三乙胺溶液中包括三乙胺和乙腈溶液。