[發明專利]一種果實低酸調控基因MdMYB44及其應用

有效

• 申請號: 202011224964.6
• 申請日: 2020-11-05
• 公開（公告）號: CN112375764B
• 公開（公告）日: 2022-02-22
• 發明（設計）人: 賈東杰;尹玉鳳;黨慶媛;沙海云;聶繼云;原永兵
• 申請（專利權）人: 青島農業大學
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C07K14/415;C12N15/84;A01H5/08;A01H6/74;A01H6/82
• 代理公司: 北京中北知識產權代理有限公司 11253
• 代理人: 王皎

1.一種果實低酸調控基因MdMYB44的應用，其特征在于：通過克隆基因MdMYB44，構建MdMYB44過表達載體轉化番茄，并異源過表達轉化番茄，獲得酸含量顯著降低的轉基因低酸性狀番茄的應用，所述MdMYB44基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述MdMYB44基因的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.根據權利要求1所述的果實低酸調控基因MdMYB44的應用，其特征在于：克隆所述基因MdMYB44的正向引物為：ATGGCTTCCACAAAGAAGGTG，反向引物為：CTACTCGATTCTACTAATCCCG。

3.根據權利要求1所述的果實低酸調控基因MdMYB44的應用，其特征在于：所述基因MdMYB44通過BSA-seq方法對蘋果果實酸度性狀進行QTL定位獲得，具體過程為：選擇具有極端表型差異的親本構建分離群體，構建高酸和低酸的表型DNA混合池，進行測序分析獲得。

4.根據權利要求1所述的果實低酸調控基因MdMYB44的應用，其特征在于：所述MdMYB44過表達載體構建的具體步驟為：

(1)目的片段的獲得，根據基因的序列設計特異引物，并在引物兩端加入酶切位點，以克隆載體為模板，進行PCR擴增反應，獲得帶有酶切位點的MdMYB44編碼區擴增產物，即目的片段；

(2)目的片段的回收，將步驟(1)中帶酶切位點的MdMYB44基因PCR產物片段和載體pMDC83酶切，并分別回收酶切產物，然后將回收的MdMYB44基因PCR產物片段和載體pMDC83進行連接；

(3)將步驟(1)中的目的片段連接到過表達載體PMDC83；

(4)將步驟(3)的連接產物轉化大腸桿菌感受態細胞DH5α，菌落PCR鑒定陽性重組子；

(5)將步驟(4)構建好的表達載體轉化農桿菌感受態EHA105，獲得的工程菌EHA105/PMDC83-MdMYB44用于轉化蘋果愈傷組織。

5.根據權利要求4所述的果實低酸調控基因MdMYB44的應用，其特征在于：所述步驟(1)中的克隆載體為pEASY-blunt，酶切位點為Pac1和Asc1。

6.根據權利要求1所述的果實低酸調控基因MdMYB44的應用，其特征在于：將所述過表達載體和干擾載體轉化蘋果愈傷組織和注射蘋果果實，表明MdMYB44基因在過表達MdMYB44的轉基因愈傷和瞬轉果實中的蘋果酸含量顯著低于轉化空載體pMDC83。

7.根據權利要求1所述的果實低酸調控基因MdMYB44的應用，其特征在于：所述基因MdMYB44通過負向調控Ma1、Ma10、MdVHA-A3、MdVHA-D2的啟動子活性來抑制蘋果酸的轉運，產生低酸性狀。