[發(fā)明專(zhuān)利]基因工程菌及其制備9α,22-二羥基-23,24-雙降膽甾-4-烯-3-酮的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011223266.4
• 申請(qǐng)日: 2020-11-05
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112094797B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-02-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬延和;李雪梅;吳洽慶;馮進(jìn)輝;朱敦明;張瑞;王玉;徐自祥;卜丹丹
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院天津工業(yè)生物技術(shù)研究所
• 主分類(lèi)號(hào): C12N1/21
• 分類(lèi)號(hào): C12N1/21;C12P33/02;C12R1/32
• 代理公司: 北京商專(zhuān)永信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11400
• 代理人: 歐陽(yáng)石文

1.一種分枝桿菌(Mycobacterium)基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌是將分枝桿菌中的3個(gè)3-甾酮-?¹-脫氫酶的基因kstd 1、kstd 2和kstd 3的表達(dá)量降低、失活或敲除，同時(shí)過(guò)表達(dá)編碼乙酰輔酶A乙酰轉(zhuǎn)移酶/硫解酶和DNA結(jié)合蛋白的基因構(gòu)建獲得；其中，所述分枝桿菌的出發(fā)菌是能將植物甾醇全部代謝為二氧化碳和水的分枝桿菌，所述乙酰輔酶A乙酰轉(zhuǎn)移酶/硫解酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示，所述DNA結(jié)合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示。

2.如權(quán)利要求1所述的分枝桿菌基因工程菌，其特征在于，其出發(fā)菌是菌種號(hào)為ATCC700084的Mycobacterium smegmatis mc²155。

3.如權(quán)利要求1所述的分枝桿菌基因工程菌，其特征在于，所述的3個(gè)3-甾酮-?¹-脫氫酶的編碼基因kstd 1、kstd 2和kstd 3的核苷酸序列分別如SEQ ID NO：1，SEQ ID NO：2，SEQ ID NO：3所示。

4.如權(quán)利要求1至3任一項(xiàng)所述的分枝桿菌基因工程菌在制備9α，22-二羥基-23，24-雙降膽甾-4-烯-3-酮中的應(yīng)用。

5.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，利用所述的基因工程菌，以甾醇為發(fā)酵原料進(jìn)行發(fā)酵以生產(chǎn)9α，22-二羥基-23，24-雙降膽甾-4-烯-3-酮。

6.如權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，所述發(fā)酵是在25-45℃下進(jìn)行。

7.如權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述發(fā)酵是在25-37℃下進(jìn)行發(fā)酵。

8.如權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，發(fā)酵時(shí)的pH為7-8。