[發明專利]一種用于特異性檢測卡那霉素的電化學發光適配體傳感器以及制備方法和應用

有效

• 申請號: 202011222629.2
• 申請日: 2020-11-05
• 公開（公告）號: CN112505116B
• 公開（公告）日: 2023-01-17
• 發明（設計）人: 陳智棟;溫靜;單學凌;蔣鼎
• 申請（專利權）人: 常州大學
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327;G01N21/76;G01N27/48
• 代理公司: 常州市英諾創信專利代理事務所(普通合伙) 32258
• 代理人: 王志慧

1.一種用于特異性檢測卡那霉素的電化學發光適配體傳感器，其特征在于：所述的電化學發光適配體傳感器由適配體負載于復合材料HLPNs@Ag/BPQDs修飾到玻碳電極表面，得到COOH-apt/HLPNs@Ag/BP/GCE，用于電化學發光檢測卡那霉素；

COOH-apt/HLPNs@Ag/BP/GCE的制備方法如下：

（1）HLPNs@Ag復合材料的制備：將HLPNs分散在超純水中，依次加入檸檬酸鈉和新制的AgNO₃，在氮氣中室溫攪拌，然后通過離心、干燥，制得紅棕色固體，即HLPNs@Ag；

（2）通過液相剝離法制備得到黑磷量子點；

（3）HLPNs@Ag/BP復合材料的制備：將HLPNs@Ag和黑磷量子點溶解在水中，室溫攪拌，通過離心、干燥，得到產物，即HLPNs@Ag/BP；

（4）將玻碳電極(GCE)拋光、清洗后滴加HLPNs@Ag/BP的水分散液于GCE表面，自然晾干，得到HLPNs@Ag/BP/GCE修飾電極，然后，再滴涂適配體得到COOH-apt/HLPNs@Ag/BP/GCE修飾電極，低溫儲存備用，得到電化學發光適配體傳感器；

所述適配體的核苷酸序列如下所示：

apt: 5'-HOOC-AGA TGG GGG TTG AGG CTA AGC CGA-3'。

2.一種根據權利要求1所述的電化學發光適配體傳感器特異性檢測卡那霉素的方法，其特征在于，電化學發光檢測方法具體步驟如下：

（1）含過硫酸鉀(K₂S₂O₈)的磷酸鹽緩沖溶液的配制；

（2）含不同濃度卡那霉素和0.1mol/L K₂S₂O₈的PBS緩沖溶液的配制；

準確稱取一定量的卡那霉素，用去離子水配制1.0×10^-4mol/L溶液，將一定量卡那霉素溶液加入含0.1 mol/L K₂S₂O₈的0.1 mol/L pH=7.4的PBS緩沖溶液中，得到一系列不同濃度的卡那霉素標準溶液，濃度范圍為1.0×10^-12mol/L~1.0×10^-7mol/L；

（3）標準曲線的繪制

將修飾電極COOH-apt/HLPNs@Ag/BP/GCE作為工作電極，鉑電極作為輔助電極，Ag/AgCl作為參比電極，組成三電極體系，將三電極體系置于上述含一系列不同濃度卡那霉素和0.1mol/L K₂S₂O₈的PBS緩沖溶液中浸泡一定時間，并以含有0.1mol/L的K₂S₂O₈的pH=7.4的0.1mol/L PBS緩沖液作為空白溶液檢測發光強度；在-1.8~0V的電化學窗口范圍內，光電倍增管高壓800V，掃速0.1V/s，進行循環伏安掃描，記錄電位-發光強度曲線(E-ECL)，建立加入卡那霉素前后的發光強度差值與卡那霉素濃度對數值的線性關系，得到相應的線性回歸方程；

（4）實際樣品檢測

實際樣品檢測先作前處理再調節pH，按照上述步驟(3)中的線性回歸方程進行計算。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于：步驟（1）所述的磷酸鹽緩沖溶液含0.1mol/L K₂S₂O₈，磷酸鹽緩沖溶液的pH為7.4，其濃度為0.1 mol/L，步驟（3）中所述浸泡一定時間為浸泡20min。