[發明專利]一種間充質干細胞儲存液

在審

• 申請號: 202011218321.0
• 申請日: 2020-11-04
• 公開（公告）號: CN112450205A
• 公開（公告）日: 2021-03-09
• 發明（設計）人: 王晶;徐妍
• 申請（專利權）人: 深圳盛皓生物科技有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 北京睿博行遠知識產權代理有限公司 11297
• 代理人: 龔家驊

本發明公開了一種間充質干細胞儲存液，所述儲存液是由葡萄糖、人血清白蛋白、黃酮類化合物、肝素、亞硒酸鈉、成纖維細胞生長因子和氯化鈉組成的水溶液。所述儲存液具體為：葡萄糖，70?80g/L；人血清白蛋白，40?45g/L；二氫槲皮素，110?140umol/L；肝素，0.15?0.2mol/L；亞硒酸鈉，1.2?1.5g/L；成纖維細胞生長因子，0.2?0.4g/L；氯化鈉，9g/L。經實驗證明，采用本發明間充質干細胞儲存液保存間充質干細胞，保持成活率95％以上可達72小時，可適應長時間長距離的儲存運輸，運輸成活率高，不影響細胞活性。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種間充質干細胞儲存液。

背景技術

間充質干細胞(mesenchymal stem cells，MSCs)是中胚層來源的具有高度自我更新能力和多向分化潛能的多能干細胞，已從肌肉、脂肪、牙周質、臍血、臍帶等多種組織中分離得到。經研究證實，MSCs免疫原性較低，不易引起機體的排斥反應；具有分化成其他中胚層細胞的潛能，能夠分泌多種細胞因子；具有定向遷移能力。MSCs具有的這些優良特性使之在受損組織修復、器官移植、自體免疫性疾病治療、腫瘤治療等方面展現出良好的應用前景。

人類間充質干細胞體外擴增第1代至第8代期間MSCs生長速度很快，以指數形式快速增值，且MSCs基因組沒有顯著的改變，僅有一些很低水平的單核苷酸的變化；第8代以后，擴增速度明顯降低；第10代到第13代，細胞體積開始增大，核/質比變大。雖然細胞的分化潛能從第1到第13代幾乎沒有變化，但是在第13代的時候，17％-36％的MSCs出現了突變，而且這些突變導致了非同義氨基酸的突變，引發了一些基因的突變。而且他們發現這些基因與成骨分化、骨代謝、腫瘤發生、干細胞干性的保持等功能相關。說明MSCs在體外擴增的過程中，如果代數超過12代，就會引起MSCs產生癌變的風險。體外擴增的MSCs在臨床應用上的應用最好限制在12代以內。

但是能制備間充質干細胞的醫療機構必須具備GMP(藥品生產質量管理規范)合格的千級細胞層流房，這樣的醫療機構畢竟是少數，所以臨床上間充質干細胞的廣泛應用必須解決一個遠距離運輸的問題。目前常用的細胞運輸方式有兩種，一種是非培養狀態低溫液氮運輸，液氮凍存的細胞外送一般不能上飛機、高鐵，若選擇汽車，運輸時間超過12小時以上液氮會完全揮發，凍存的細胞會升溫死亡，同時凍存過的細胞活性會下降。另一種是培養狀態下裝滿培養基運輸，運輸時間超過5小時，細胞培養液pH值會升高，細胞形態會發生變化，影響細胞分化潛能和免疫調節能力，而且細胞受污染的風險會升高。

因此，在保證儲存液的成分對人體安全的情況下，如何提供一種能長時間保存MSCs的儲存液，以便于MSCs的遠距離儲存運輸，是目前本領域技術人員亟待解決的技術問題。

發明內容

鑒于現有技術中MSCs存在不便于遠距離運輸的問題，本發明提供了一種間充質干細胞儲存液，所述儲存液是由葡萄糖、人血清白蛋白、黃酮類化合物、肝素、亞硒酸鈉、堿性成纖維細胞生長因子和氯化鈉組成的水溶液。

優選的，所述儲存液具體為：

優選的，所述儲存液具體為：

本發明公開了一種間充質干細胞培養基，儲存液是由葡萄糖、人血清白蛋白、黃酮類化合物、肝素、亞硒酸鈉、成纖維細胞生長因子和氯化鈉組成的水溶液，其能保持細胞的正常形態，保證了間充質干細胞臨床應用的安全性和可靠性，可提高間充質干細胞的活性，促進其增殖并減少細胞凋亡，有效發揮間充質干細胞的治療作用。

本發明中黃酮類化合物優選二氫槲皮素，其具有強效抗氧化性，能夠抗菌抗病毒，與其他組分協同對間充質干細胞起保護作用，可顯著提高間充質干細胞的存活率、抑制其調亡、降低細胞內自由基水平。

本發明中成纖維細胞生長因子還可維持細胞活性，在長期儲存下提高細胞復蘇率。