[發明專利]一種兒茶酚胺及其代謝物檢測試劑盒和檢測方法

在審

• 申請號: 202011217772.2
• 申請日: 2020-11-04
• 公開（公告）號: CN114441664A
• 公開（公告）日: 2022-05-06
• 發明（設計）人: 張曉哲;劉欣欣;劉丹;程孟春;趙楠
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京元周律知識產權代理有限公司 11540
• 代理人: 張梅娟

本申請公開了一種兒茶酚胺及其代謝物檢測試劑盒和檢測方法，特別是用于尿液中兒茶酚胺及其代謝物的檢測，所述試劑盒包括稀釋液、洗脫液。通過對預處理后的含有同位素內標物的尿液樣本，進行液相色譜?質譜檢測，將得到的檢測數據與標準曲線對照，該試劑盒能同時測定兒茶酚胺及其代謝物共6個化合物的含量，提高了檢測的時效性并降低經濟成本，能夠滿足臨床液質檢測需求。

技術領域

本申請涉及一種兒茶酚胺及其代謝物檢測試劑盒和檢測方法，屬于分析化學及臨床檢驗技術領域。

背景技術

嗜鉻細胞瘤起源于腎上腺髓質嗜鉻細胞，分泌產生兒茶酚胺，包括多巴胺(DA)、腎上腺素(E)和去甲腎上腺素(NE)；副神經節瘤起源于腎上腺外嗜鉻細胞，位于胸、腹和盆腔脊柱旁交感神經鏈，二者總稱PPGLs(pheochromocytomas or paragangliomas)，是繼發性高血壓的少見類型，在普通門診高血壓患者中的患病率為0.2％～0.6％。副神經節瘤的臨床表現多為頑固性高血壓，有的患者伴有發作性多汗、心悸、頭痛、震顫、皮膚蒼白等癥狀和/或體位性低血壓；有的首發癥狀為麻醉時出現高血壓或高血壓危象；有的患者可因嚴重心血管并發癥而致死亡。

兒茶酚胺及其代謝物的測定是定性診斷PPGL的主要方法，包括DA、E和NE及其中間代謝產物，3-甲氧酪胺(3-MT)、變腎上腺素(MN)和去甲變腎上腺素(NMN)，MN和NMN合成MNs。《嗜鉻細胞瘤和副神經節瘤診斷治療的專家共識》推薦診斷PPGL的首選生化檢測為測定血游離血漿游離MNs，其次可檢測血或尿DA、E和NE濃度。另外，3-MT被認為是識別嗜鉻細胞瘤有無轉移的重要標志，而對于個別只分泌DA的PPGL可以檢測血漿或尿液DA及其代謝產物3-MT的水平。

現有兒茶酚胺及其代謝物的測定方法主要為免疫測定和液相色譜串聯質譜法測定。使用液相串聯質譜聯用技術可以在復雜基質如人血漿和尿液中獲得更高的靈敏度和特異性，可以降低對繼發性高血壓的誤診率，減少進一步檢測(如影像學檢測)的必要；同時液相色譜串聯質譜技術可以分離干擾和結構相似的化合物；但目前缺乏能夠同時檢測6個兒茶酚胺及其代謝物的方法。而免疫測定則可能遭受來自類腎上腺素化合物的交叉反應干擾，導致錯誤的結果。

發明內容

根據本申請的一個方面，提供了一種兒茶酚胺及其代謝物檢測試劑盒和檢測方法，特別是用于尿液中兒茶酚胺及其代謝物的檢測，通過對預處理后的含有同位素內標物的尿液樣本，進行液相色譜-質譜檢測，將得到的檢測數據與標準曲線對照，該試劑盒能同時測定兒茶酚胺及其代謝物共6個化合物的含量，提高了檢測的時效性并降低經濟成本，能夠滿足臨床液質檢測需求。

一種兒茶酚胺及其代謝物檢測試劑盒，所述試劑盒包括稀釋液、洗脫液。

可選地，稀釋液包括乙酸銨；

洗脫液包括甲酸。

可選地，稀釋液為50～500mM的乙酸銨水溶液；

洗脫液為甲酸溶液；

甲酸溶液中，甲酸的體積分數為0.1％～10％；

優選地，洗脫液為含體積分數為0.1％～10％甲酸的乙腈和/或含體積分數為0.1％～10％甲酸的甲醇。

可選地，試劑盒中還包括活化劑和清洗液；

活化劑包括甲醇、水中的至少一種；

清洗液包括乙酸銨、有機溶劑中的至少一種。

可選地，清洗液包括濃度為10～100mM的乙酸銨水溶液；

有機溶劑選自甲醇、乙腈、異丙醇中的至少一種。

可選地，試劑盒中還包括同位素內標物和/或同位素內標物溶液；

同位素內標物包括兒茶酚胺及其代謝物的¹³C標記物或氘代標記物；