[發明專利]一種檢測蝦夷扇貝的實時熒光PCR引物探針及方法

在審

• 申請號: 202011213818.3
• 申請日: 2020-11-04
• 公開（公告）號: CN112176074A
• 公開（公告）日: 2021-01-05
• 發明（設計）人: 王慶志;楊滴;李華琳;滕煒鳴;劉項峰;于佐安;謝璽;李大成;傅志宇;張明
• 申請（專利權）人: 遼寧省海洋水產科學研究院
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 錦州遼西專利事務所(普通合伙) 21225
• 代理人: 王佳佳

1.一種檢測蝦夷扇貝的實時熒光PCR引物探針及方法，其特征是：

分別為：

上游引物P1：TGGCTTCTGCCTTTGTTGTTG；

下游引物P2：GCAAAAGGGACAAGCCAAAA；

帶有熒光染料的探針序列為：AGATTCCCTCGGGTCAACGCTCTGA。

2.根據權利要求1所述的檢測蝦夷扇貝的實時熒光PCR引物探針及方法，其特征是：所述的熒光染料，5’端為FAM標記，3’端TAMRA標記。

3.一種利用如權利要求1所述實時熒光PCR引物探針檢測蝦夷扇貝的實時熒光PCR方法，其特征是：

其步驟如下：

a.提取待檢樣品基因組DNA；

b.以所提取的DNA作為模板，加入實時熒光PCR引物探針以及酶反應液進行實時熒光PCR反應，記錄樣品反應的Ct值；

所述的實時熒光PCR反應體系為：

4.根據權利要求3所述的檢測蝦夷扇貝的實時熒光PCR方法，其特征是：所述實時熒光PCR反應條件為：95℃ 20s，1個循環；95℃ 3s、60℃ 30s，40個循環。

5.根據權利要求4所述的檢測蝦夷扇貝的實時熒光PCR方法，其特征是：所述實時熒光PCR方法設置空白對照、陰性對照、陽性對照，判定標準為：

空白對照：以ddH₂O為模板，按照所述實時熒光PCR反應體系和所述實時熒光PCR反應條件，進行實時熒光PCR反應，檢測Ct值大于或等于40；

陰性對照：以非蝦夷扇貝物種基因組DNA為模板，按所述實時熒光PCR反應體系和所述實時熒光PCR反應條件，進行實時熒光PCR反應，檢測Ct值大于或等于40；

陽性對照：以蝦夷扇貝物種基因組DNA為模板，按所述實時熒光PCR反應體系和所述實時熒光PCR反應條件，進行實時熒光PCR反應，檢測Ct值小于或等于30；

待測樣品蝦夷扇貝基因檢測Ct值大于等于40，陰性對照、陽性對照和空白對照結果正常者，判定該樣品未檢出蝦夷扇貝基因；待測樣品蝦夷扇貝基因檢測Ct值小于等于36，陰性對照、陽性對照和空白對照結果正常者，判定該樣品檢出蝦夷扇貝基因；待測樣品蝦夷扇貝基因檢測Ct值在36～40之間，重做實時熒光PCR擴增，再次擴增后結果Ct值大于40且陰性對照、陽性對照和空白對照結果正常，判定該樣品未檢出蝦夷扇貝基因；再次擴增后結果Ct值仍小于40且陰性對照、陽性對照和空白對照結果正常，判定該樣品檢出蝦夷扇貝基因。