[發明專利]檢測恩諾沙星的電化學發光適配體傳感器及其制備方法和檢測恩諾沙星的方法

在審

• 申請號: 202011211366.5
• 申請日: 2020-11-03
• 公開（公告）號: CN112505024A
• 公開（公告）日: 2021-03-16
• 發明（設計）人: 蔣鼎;秦明;王文昌;陳智棟
• 申請（專利權）人: 常州大學
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76;G01N27/48;G01N27/327
• 代理公司: 常州市英諾創信專利代理事務所(普通合伙) 32258
• 代理人: 李楠

本發明公開了本發明提供一種檢測恩諾沙星的電化學發光適配體傳感器及其制備方法和應用，首先利用濕化學法制備碳化鈦?溴化銀納米復合材料，再將其修飾在玻碳電極表面，再負載含有3’?CCC ATC AGG GGG CTA GGC TAA CAC GGT TCG GCT CTC TGA GCC CGG GTT ATT TCA GGG GGA?5’COOH堿基序列的適配體，構建電化學發光適配體傳感器，并基于該電化學發光適配體傳感器檢測檢測恩諾沙星，具有操作簡單、選擇性好、檢測成本低、靈敏度高的特點。

技術領域

本發明屬于電化學發光檢測領域，涉及一種檢測恩諾沙星的電化學發光適配體傳感器及其制備方法和檢測恩諾沙星的方法。

背景技術

恩諾沙星(Enrofloxacin，簡稱ENR)，又稱乙基環丙沙星、恩氟沙星，屬于氟喹諾酮類化學合成抑菌劑。恩諾沙星被國家指定為動物專用藥，它因具有抗菌性強、作用迅速、體內分布廣及與其他抗生素間無交叉耐藥性等特點而在動物和水產養殖業中被廣泛應用。目前恩諾沙星己經列為獸藥殘留監控的重點，2002年12月我國農業部公告第235號文規定在所有食品動物的肌肉、脂肪中最高殘留限量為100μg/kg，在所有食品動物的肝、腎中最高殘留限量為200μg/kg，歐盟也規定了動物源性食品中ENR的最大殘留檢測限為0.3μg/g。由于過量使用這種藥物，使得其在動物體內大量的積累、殘留，使得動物體的排泄物中也存在該物質，并且對周圍的環境也產生了影響。其中水資源就遭受了嚴重的污染。然而，一旦水資源受到污染，那么人類的健康、公共安全和野外環境的安全都將受到威脅，因此需要一種高效準確地方法來監測水源的安全。

目前，已經被報道的測定恩諾沙星的方法主要有：高效液相色譜法(HPLC)，毛細血管電泳法(CEP)，熒光光度法(FL)，化學發光免疫分析法(CLIA)，酶聯免疫法(ELISA)等。但這些分析方法存在很多局限性，比如，高效液相色譜法與毛細血管電泳法具有較高的準確度，但儀器昂貴，分析靈敏度低；熒光光度法與化學發光法雖然具有較高的靈敏度，但是其需要特殊試劑且方法的選擇性較差；而酶聯免疫法，制備的抗體與多種殘留藥物進行反應，不宜作為單一檢測方法，僅適用于對大量樣品的快速篩選與檢測；而免疫分析方法均是基于抗原-抗體特異性識別反應建立起來的，其原料抗體生產成本高、免疫活性易受離子強度、pH等環境因素影響。核酸適配體(Aptamer)，又稱為模擬抗體，合成簡單快速、成本低、選擇性好、性質穩定且易于修飾標記，是一種新型的優良抗體替代識別元件。因此，開發一種簡單快速、選擇性好的檢測恩諾沙星的方法是必要且極其重要的。

電化學發光(ECL)也稱為電致化學發光，是一種將電能轉化為光能的分析技術，無需引入外部光源，在光電倍增管等光學儀器的輔助下采集發光強度圖譜，并建立其與待測物關系從而實現微量分析的一種方法。它是化學發光和電化學方法的結合，具有操作簡便、靈敏度高、背景低和檢測時間短等優點。將電化學發光法與生物識別分子結合起來，可顯著提高分析檢測靈敏度和選擇性，特別適用于被測物濃度低，組分復雜，干擾物多的環境樣品。

發明內容

本發明的目的在于針對恩諾沙星檢測現有技術的不足，提供一種檢測恩諾沙星的電化學發光適配體傳感器及其制備方法和檢測恩諾沙星的方法。本發明采用濕化學法制備碳化鈦-溴化銀納米復合材料(Ti₃C₂-AgBr納米復合材料)，并將其修飾到玻碳電極表面，使得電化學發光的靈敏度和穩定性顯著提高，再通過靜電吸附作用負載適配體進而獲得電化學發光適配體傳感器(簡稱Aptamer/Ti₃C₂-AgBr/GCE傳感器)，可特異性識別目標分子恩諾沙星，提高了對恩諾沙星的選擇性。

為了實現本發明目的，所采用的技術方案為：