[發明專利]一種抑制MOR基因表達的siRNA及其應用

在審

• 申請號: 202011208376.3
• 申請日: 2020-11-03
• 公開（公告）號: CN112280780A
• 公開（公告）日: 2021-01-29
• 發明（設計）人: 陳熹;袁媛;張麗
• 申請（專利權）人: 南京大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/63;A61K31/713;A61P25/30
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 傅婷婷;徐冬濤

本發明公開了一種抑制MOR基因表達的siRNA及其應用。MOR基因的siRNA，其正義鏈序列選自SEQ ID NO：2～4中任意一條所示序列；優選SEQ ID NO：2所示的序列。MOR基因的siRNA前體序列，選自SEQ ID NO：6～8中任意一條所示序列，優選SEQ ID NO：7所示的序列。本發明首次開發了針對MOR特異性設計的siRNA序列，可有效抑制腦組織中MOR的表達，可有效治療阿片類藥物成癮，且不會造成宿主抑郁。本發明通過開發設計特定蛋白標簽(RVG?Lamp2b),使得在其下游與其串聯表達的siRNA，能夠順利、高效穿過血腦屏障，到達腦組織并發揮功能。

技術領域

本發明屬于生物醫藥領域，具體涉及一種抑制MOR基因表達的siRNA及其應用。

背景技術

阿片類藥物成癮的流行，是一種影響所有醫學領域公共衛生危機的，必須要治療，不可選擇的疾病。這種疾病從未依賴藥物，非依賴狀態到依賴和退縮狀態的過渡性轉換代表了與阿片獎賞記憶形成相關的不同神經元和分子底物之間的關鍵邊界，確定與獎賞效應密切聯系。目前用于治療阿片類藥物成癮疾病的藥物中，反義寡核苷酸類藥物最為優越。siRNA藥物是從翻譯水平上降低蛋白的表達，不會改變基因序列，特異性強，且具有生物降解性，基本不存在藥物積累產生毒性的問題。但如何建立一個安全高效的載體遞送系統幫助siRNA逃避先天免疫系統的識別，還需要進一步的開發研究。

阿片受體是介導內源性阿片肽和阿片藥物起作用的受體，主要有μ受體、κ受體和δ三種。其中參與藥物依賴成癮過程最密切的就是μ受體。目前用于治療成癮的藥物也大多是以μ受體(MOR)為靶標。

外泌體(exosomes)被認為是用于siRNA遞送的強有力的載體。因為外泌體是機體自身細胞可以產生的，基本沒有免疫原性，且可以被生物體自然降解。這些內源性產生的細胞外囊泡可以通過在細胞間轉移脂質，利用蛋白質和RNA來介導細胞間通訊，理論上是一種趨近完美的納米顆粒。

發明內容

本發明的目的是針對現有技術的上述不足，提供一種抑制MOR基因表達的siRNA，及其前體序列。

本發明的另一目的是提供表達上述siRNA的表達載體。

本發明的又一目的是提供上述siRNA、其前體序列及表達載體的應用。

本發明的目的可通過以下技術方案實現：

MOR基因的siRNA，其正義鏈序列選自SEQ ID NO：2～4中任意一條所示序列；優選SEQ ID NO：2所示的序列：

Oligo-2F:TGACCAGGAAGTTTCCAAAGA(SEQ ID NO：2)

Oligo-3F:TGCAGAGGATGTTTCCAAAGG(SEQ ID NO：3)

Oligo-4F:TAAGGCATCTGCCAGAGCAAG(SEQ ID NO：4)。

一種MOR基因的siRNA前體序列，如Seq正向-X-Seq反向所示；其中，Seq正向為所需要的第一核糖核酸序列，其中所述的第一核糖核酸序列包括權利要求1所述的MOR基因的siRNA的正義鏈序列；Seq反向為與Seq正向基本互補或完全互補的序列，且B2與X不互補；X為莖環結構序列。

作為本發明的一種優選，所述的MOR基因的siRNA前體序列，選自SEQ ID NO：6～8中任意一條所示序列，優選SEQ ID NO：6所示的序列：

12MR0155-2F:5’-TGCTGTGACCAGGAAGTTTCCAAAGAGTTTTGGCCACTGACTGACTCTTTGGACTTCCTGGTCA-3’(SEQ ID NO：6)；