[發明專利]用于特異性分離目標核酸的方法

在審

• 申請號: 202011208048.3
• 申請日: 2014-01-27
• 公開（公告）號: CN112280680A
• 公開（公告）日: 2021-01-29
• 發明（設計）人: F·塔倫多
• 申請（專利權）人: 生物梅里埃公司
• 主分類號: C12N1/02
• 分類號: C12N1/02;C12Q1/06
• 代理公司: 永新專利商標代理有限公司 72002
• 代理人: 左路;林曉紅

1.一種在液體生物樣品中選擇性分離目標微生物的方法，所述液體生物樣品包括或可能包括：

·其細胞膜或衣殼不包含膽固醇的目標微生物，和

·非靶標成分，即：

-其細胞膜包含膽固醇的非靶標細胞，和

-任選存在的，具有包含膽固醇的包膜的病毒，和

-任選存在的，包含膽固醇的支原體，和

-任選存在的，目標微生物和/或非靶標細胞的碎片，

所述方法包括以下步驟：

a)將液體生物樣品與皂苷制劑接觸，以便使包含膽固醇的細胞膜或包含膽固醇的病毒包膜或包含膽固醇的支原體膜不穩定，

b)對非靶標細胞進行滲透壓休克以便將它們特異性裂解，

c)在步驟a)中、或步驟a)和b)之后，加入沉淀劑以沉淀所述液體生物樣品溶液中未裂解目標微生物，且使得包含目標微生物的沉淀物粘附到塑料管上，并耐受表面沖洗，其中所述沉淀劑為聚乙二醇，

d)對所述液體生物樣品溶液進行離心并去除上清液，

e)添加能夠裂解來源于樣品溶液中裂解的非靶標成分的游離核酸的至少一種核酸酶的溶液，以允許目標微生物被選擇性獲得。

2.權利要求1的分離方法，其特征在于皂苷的體積至少大于或等于相同濃度的樣品的體積。

3.權利要求2的分離方法，其特征在于皂苷終濃度大于0.02％并小于或等于20％。

4.權利要求1-3任一項的分離方法，其特征在于皂苷由三萜類組成。

5.權利要求1的分離方法，其特征在于能裂解游離核酸的核酸酶隨后被失活：

·通過添加EDTA和/或EGTA和/或DTT和/或β-巰基乙醇和/或DEPC和/或胍化學失活，和/或

·通過在存在或不存在去污劑，諸如十二烷基硫酸鈉(SDS)的條件下，將溫度升高到40-100℃物理失活。

6.權利要求1的分離方法，其特征在于在所述方法期間，通過添加下述溶液，將pH維持在5-10，優選6-9的范圍：

·如果pH低于5，優選低于6，所述溶液是堿性溶液，·如果pH高于10，優選高于9，所述溶液是酸性溶液，

使得pH在所述范圍內。