[發明專利]一種基于柱層析法分離目標雙特異性抗體與副產物的方法

在審

• 申請號: 202011207430.2
• 申請日: 2020-11-03
• 公開（公告）號: CN112300287A
• 公開（公告）日: 2021-02-02
• 發明（設計）人: 李智;諸葛鑫;劉金濤
• 申請（專利權）人: 李智
• 主分類號: C07K16/46
• 分類號: C07K16/46;C07K1/16;B01D15/38;C08J9/42;C08J9/40;C08J9/28;C08L67/04
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 王熙文

1.一種基于柱層析法分離目標雙特異性抗體與副產物的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)將PLLA常溫條件下溶于三氯甲烷內，得到質量濃度為12-15％的溶解液置于模具內并加入冰晶片，攪拌混合處理，之后進行真空冷凍干燥處理，最后進行加熱干燥，制得聚乳酸多孔凝膠；

(2)將納米羥基磷灰石分散于去離子水中制得納米羥基磷灰石分散液；將瓊脂糖和去離子水加熱溶解制得瓊脂糖溶液，滴加納米羥基磷灰石分散液，最后加入上述制得的聚乳酸多孔凝膠，攪拌混合處理，最后降溫凝膠化處理，干燥后制得柱層析填料；

(3)將上述制得的柱層析填料裝進層析柱內，首先采用PBS緩沖液對層析柱進行預平衡處理，然后將待純化的雙特異性抗體樣品上樣至層析柱內；然后采用PBS緩沖液進行清洗；最后采用洗脫液對層析柱進行洗脫，并收集洗脫液，制得純化的雙特異性抗體。

2.根據權利要求1所述的一種基于柱層析法分離目標雙特異性抗體與副產物的方法，其特征在于，步驟(1)中，所述冰晶片的添加量為PLLA質量的5-10％。

3.根據權利要求1所述的一種基于柱層析法分離目標雙特異性抗體與副產物的方法，其特征在于，步驟(1)中，所述真空冷凍干燥的條件為：首先在-1～-5℃、0.01-0.04MPa的壓力下處理1-2h，然后在-30～-40℃下處理10-20h。

4.根據權利要求1所述的一種基于柱層析法分離目標雙特異性抗體與副產物的方法，其特征在于，步驟(1)中，所述加熱干燥的溫度為35-45℃，所述加熱干燥的時間為5-10h。

5.根據權利要求1所述的一種基于柱層析法分離目標雙特異性抗體與副產物的方法，其特征在于，步驟(2)中，所述納米羥基磷灰石分散液的質量濃度為1-4％；所述瓊脂糖溶液的主質量濃度為3-5％，所述納米羥基磷灰石、所述瓊脂糖、所述聚乳酸多孔凝膠的質量比為3：(1-2)：10。

6.根據權利要求1所述的一種基于柱層析法分離目標雙特異性抗體與副產物的方法，其特征在于，步驟(2)中，所述加熱溶解的溫度為95-100℃，加熱溶解的時間為1-2h。

7.根據權利要求1所述的一種基于柱層析法分離目標雙特異性抗體與副產物的方法，其特征在于，步驟(2)中，所述攪拌混合處理的轉速為800-1000rpm，溫度為95-100℃，時間為60-100min。

8.根據權利要求1所述的一種基于柱層析法分離目標雙特異性抗體與副產物的方法，其特征在于，步驟(2)中，所述降溫凝膠化處理的條件為：首先以5-8℃/min的速率降溫至55-65℃，攪拌處理30-50min，最后以1℃/min的降溫速率降溫至常溫，攪拌處理3-5h。

9.根據權利要求1所述的一種基于柱層析法分離目標雙特異性抗體與副產物的方法，其特征在于，步驟(3)中，所述PBS緩沖液的pH為7-7.5。

10.根據權利要求1所述的一種基于柱層析法分離目標雙特異性抗體與副產物的方法，其特征在于，步驟(3)中，所述洗脫液為0.35-0.55mol/L的甘氨酸溶液，其pH為2.5-3.5。