[發明專利]一種檢測基質金屬蛋白酶的電化學傳感器及檢測方法

有效

• 申請號: 202011207150.1
• 申請日: 2020-11-03
• 公開（公告）號: CN112362706B
• 公開（公告）日: 2023-07-14
• 發明（設計）人: 李金龍;程文婷;張永臣;許傳軍;張兆利
• 申請（專利權）人: 南京市第二醫院
• 主分類號: G01N27/26
• 分類號: G01N27/26;G01N27/30;G01N27/327
• 代理公司: 南京瑞弘專利商標事務所(普通合伙) 32249
• 代理人: 馮慧

1.一種用電化學傳感器檢測基質金屬蛋白酶的檢測方法，其特征在于，其中電化學傳感器的制備方法具體包括如下步驟：

（1）金電極預處理：

1）金電極用氧化鋁粉末拋光至光滑；

2）將拋光后的電極浸泡在水虎魚溶液中消除吸附的有機物，并用去離子水徹底清洗，其中，水虎魚溶液中H₂SO₄與濃度為30%?的H₂O₂的體積比為?3:1；

3）將步驟2）清洗后的電極用50%硝酸浸泡10-50?min，然后，電極分別用乙醇和去離子水處理1-10?min；

4）用氮氣將步驟3）制得的電極吹干后，將電極浸入0.1-1M硫酸中，用循環伏安法從0到1.6?V進行掃描直到獲得穩定的信號，制得預處理電極；

（2）將步驟（1）制得的預處理電極浸入50-150μL，pH?6-8的多肽1溶液中孵育10-20h，多肽1通過Au-S化學鍵修飾在電極表面；

（3）在室溫下將步驟（2）制得的電極浸泡在9-巰基-1-壬醇溶液中1-5h；

（4）用蒸餾水對步驟（3）制得的電極進行沖洗并保存；

（5）合成多肽模板-AgNPs：

1)將含多肽2和AgNO₃的水溶液混合，用磁力攪拌裝置攪拌10-30分鐘；

2)通過緩慢添加1-3?mM新制備的NaBH₄溶液，對混合物進行化學還原反應,然后輕輕攪拌5-20分鐘，溶液顏色變為穩定的黃色，顯示多肽2-AgNPs的形成；

（6）多肽2-AgNPs?CB[8]??多肽1復合物的構建：

1)將多肽1修飾電極浸入含有多肽2-AgNPs和CB[8]的溶液中0.5-5小時，最終在電極表面形成多肽2-AgNPs?CB[8]??多肽1復合物；

2)將電極用洗滌液進行清洗，制得電化學傳感器；

所述的多肽1具體為FGPLGVRGKGGC-11-mercaptoundecanoic?acid?；

所述的多肽2具體為FGGGASLWWSEKL；

所述的檢測方法，具體步驟如下：

（1）將金屬基質蛋白酶-2標準樣品用PBS稀釋成不同濃度；

（2）將制備好的多肽2-AgNPs?CB[8]??多肽1修飾電極浸泡在步驟（1）制得的溶液中，保持10min-3h；

（3）電極用蒸餾水中沖洗后，進行測量；

其中，為了獲得方波伏安圖，使用Tris-HNO₃和KCl的混合物作為緩沖液；

其中，為了獲得電化學阻抗譜，將[Fe（CN）₆]^3-/4-溶液作為緩沖液，頻率在10～105Hz之間，循環伏安測量在100mV/s掃描速率下進行。

2.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，

其中，步驟（1）-2）中所述的浸泡在水虎魚溶液中的時間為10?min；

其中，步驟（1）-3）中所述的浸泡在50%硝酸的時間為30?min；

其中，步驟（1）-3）中所述的電極分別用乙醇和去離子水處理5?min；

其中，步驟（1）-4）中將電極浸入0.5?M硫酸中；

其中，步驟（2）中所述的多肽1溶液的用量為100μL，pH?7.4；

其中，步驟（2）中所述的孵育時間為16小時；

其中，步驟（3）中所述的9-巰基-1-壬醇溶液為1mM，pH7.4；

其中，步驟（3）中所述的浸泡在9-巰基-1-壬醇溶液的時間為2.5h；

其中，步驟（5）-1)中所述多肽2濃度為100ng/μL，AgNO₃濃度為0.2mM；

其中，步驟（5）-1)中所述磁力攪拌時間為20分鐘；

其中，步驟（5）-2)中所述的NaBH₄溶液濃度為2?mM；

其中，步驟（5）-2)中所述的攪拌時間為10分鐘；

其中，步驟（6）-1)中所述溶液中CB[8]的濃度為10μM；

其中，步驟（6）-1)中所述浸入時間為1小時。