[發明專利]一種消除糊精干擾的杜仲多糖質量鑒定方法

在審

• 申請號: 202011206992.5
• 申請日: 2020-11-03
• 公開（公告）號: CN112326828A
• 公開（公告）日: 2021-02-05
• 發明（設計）人: 柏雪;張登輝
• 申請（專利權）人: 西南民族大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/36;G01N30/74;G01N30/86;G01N21/78
• 代理公司: 成都正華專利代理事務所(普通合伙) 51229
• 代理人: 李蕊

1.一種消除糊精干擾的杜仲多糖質量鑒定方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)標準品溶液及多糖樣品溶液制備

取D(+)-Glc、D-Man、D-(+)-Gal、L-Rha、D-(+)-Xyl、D-Rib、L-Ara、D-GalUA、D-GlcUA、L-Fuc 10種單糖標品，用純凈水定容，得1mg/mL標準品溶液；各取等體積的10種單糖標準溶液即得單糖混合標準品溶液；向杜仲多糖中加三氟乙酸，氮氣封口后于110℃水解5h，旋干水解后的溶液，再利用甲醇洗滌后旋干，繼續重復3次除去殘留的三氟乙酸，最后加水得到多糖樣品水解溶液；

(2)顯色反應

向杜仲多糖水解溶液中滴入I-KI溶液，觀察顏色變化；

(3)多糖樣品酶解

向待測品中加入糖化酶，酶與底物質量比為1：4-6，調節pH為5.0，置于50-70℃水浴酶解50-80min，再加熱至沸，冷卻，加入無水乙醇，4℃靜置10-15h，離心，棄上清液，沉淀洗滌；

(4)多糖含量測定

對酶解后的多糖樣品進行水解，采用分光光度計在490nm波長分別測定待測品和葡萄糖標準溶液的的吸光度，建立標準曲線，得到多糖含量；

(5)杜仲多糖樣品衍生化

另取酶解后的多糖樣品水解溶液中加入三氟乙酸，氮氣封口后100-120℃水解4-6h，旋干，洗滌，再旋干，重復3次，加水得到水解液；向水解液中加入NaOH溶液和PMP甲醇溶液，在60-80℃水浴反應80-120min，冷卻后加入HCl溶液，再加入氯仿萃取，取上層液，重復3次，離心，收集上清，過濾，得待測品；

(6)測定色譜圖并對比分析

采用HPLC法測定色譜圖，并與杜仲多糖指紋圖譜對照圖譜為參照圖譜進行對比，并對單糖組成進行分析。

2.根據權利要求1所述的消除糊精干擾的杜仲多糖質量鑒定方法，其特征在于，所述(3)中糖化酶與底物的質量比為1:5。

3.根據權利要求1所述的消除糊精干擾的杜仲多糖質量鑒定方法，其特征在于，所述(3)中于60℃水浴酶解60min。

4.根據權利要求1所述的消除糊精干擾的杜仲多糖質量鑒定方法，其特征在于，所述(6)中色譜條件為色譜柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18，柱溫：35℃；檢測波長：250nm；流速：1mL/min，進樣體積：10μL，流動相：流動相A為乙腈，流動相B為0.1mol/L磷酸緩沖鹽溶液。