[發(fā)明專利]一種癌細胞膜包裹的四氧化三鐵納米粒子的制備方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202011204828.0
• 申請日: 2020-11-02
• 公開（公告）號: CN112402630A
• 公開（公告）日: 2021-02-26
• 發(fā)明（設計）人: 魏延;梁紫微;張利闖;黃棣;胡銀春;許浩
• 申請（專利權）人: 太原理工大學
• 主分類號: A61K49/14
• 分類號: A61K49/14;A61K41/00;A61P35/00;C01G49/08;B82Y40/00;B82Y30/00
• 代理公司: 太原市科瑞達專利代理有限公司 14101
• 代理人: 王思俊

1.一種癌細胞膜包裹的四氧化三鐵納米粒子的制備方法，其特征是包括下述步驟：

（1）油酸鐵前體物的合成：在圓底燒瓶中加入60 mL去離子水和20 mL無水乙醇，稱取油酸鈉4.56 g進行充分溶解；另稱取六水氯化鐵0.81 g溶解于20 mL去離子水中，待油酸鈉溶液清澈透亮后邊攪拌邊緩慢滴加，以不產生沉淀物為合適的滴加速率；滴加過程中安裝冷凝回流裝置，80 ℃反應回流4 h；結束反應，冷卻至室溫后加入20 mL正己烷將油酸鐵前體物萃取出來，轉移至分液漏斗，得到有機相，用去離子水洗滌一次，轉移至培養(yǎng)皿中，55 ℃干燥24 h，得到蠟狀油酸鐵前體物；

（2）油酸包覆納米Fe₃O₄的合成：稱取油酸鐵前體物0.92 g，加入油酸0.17 mL、 1-十八烯15 mL，超聲或攪拌至完全溶解，轉移至三口燒瓶中；安裝冷凝回流裝置，通入氮氣，控制氣流為0.05 L/min，攪拌穩(wěn)定后升溫至200 ℃，保持30 min，隨后每段20 ℃梯度升溫至305℃，開始回流計時，反應30 min，終止反應；冷卻至室溫后，加入80 mL無水乙醇沉淀納米粒子，7000 rpm離心收集，無水乙醇反復洗滌，最后分散在正己烷中保存；

（3）多巴胺水化改性納米Fe₃O₄粒子：采用配體交換法制備水溶性納米Fe₃O₄粒子，用5 mL氯仿溶解5 mg油酸包覆的納米Fe₃O₄粒子，與溶解有20 mg多巴胺的2 mL二甲基亞砜溶液在圓底燒瓶中進行充分攪拌混合；通入氮氣，加熱至70 ℃回流4 h；冷卻至室溫后，10000 rpm離心10 min收集納米粒子，重新分散于1 mL去離子水中，12000 rpm離心10 min除去大顆粒團聚物，將樣品保存于4 ℃?zhèn)溆茫?/p>

（4）癌細胞膜/全蛋白的提取：將貼壁癌細胞消化收集后重新分散于1 mL PBS溶液中，轉移至凍存管內，放入液氮罐中冷凍2 min，取出后立馬在37 ℃水浴鍋中解凍，如此反復凍融5~6次，15000 g離心10 min除去未裂解細胞以及碎片，放入-80 ℃冰箱凍存?zhèn)溆茫粚⒌攘抠N壁癌細胞消化收集后至于冰上，加入1 mL RIPA裂解液，吹打均勻，渦旋振蕩2 min后15000 g離心10 min除去膠狀物，放入-80 ℃冰箱凍存?zhèn)溆茫?/p>

（5）癌細胞膜包裹四氧化三鐵納米粒子：準備濃度為0.2 mg/mL的納米Fe₃O₄溶液以及等濃度的細胞膜/蛋白溶液，二者混合后超聲5 min；使用一次性無菌注射器和孔徑為0.22 μm的微孔濾膜濾器在三通道推進器上進行勻速擠出，反復擠出4~5次；高速離心或磁鐵吸引收集擠出后溶液中的納米粒子，加入PBS溶液重懸后裝入1.5 mL內離心管-80 ℃凍存。

2.根據(jù)權利要求1所述的一種癌細胞膜包裹的四氧化三鐵納米粒子的制備方法，其特征是得到的細胞膜/蛋白包裹四氧化三鐵納米粒子，是由立方體形轉變?yōu)榍蛐危稚⑿院茫矣忻黠@的核殼結構，中心為納米Fe₃O₄粒子，平均粒徑為4-6 nm, 周圍為蛋白分子，一個核殼結構中包含2個或多個納米粒子。

3.根據(jù)權利要求1所述的一種癌細胞膜包裹的四氧化三鐵納米粒子的制備方法，其特征是得到的細胞膜/蛋白包裹四氧化三鐵納米粒子，在體外與同源細胞更有親和性，顯示出一定的靶向性。