[發(fā)明專利]一種同時檢測多種抗生素的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011202371.X
• 申請日: 2020-11-02
• 公開（公告）號: CN112816568B
• 公開（公告）日: 2023-02-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 曹君;張思玉;趙青;張雪嬌
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院沈陽應(yīng)用生態(tài)研究所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/74;G01N30/04;G01N30/06;G01N30/14;G01N30/08;G01N30/34;G01N30/86;G01N30/88
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標(biāo)代理有限公司 21002
• 代理人: 李穎

1.一種同時檢測多種抗生素的方法，其特征在于：將待檢測樣品經(jīng)高效液相色譜串聯(lián)紫外熒光檢測儀同時對樣品中多種抗生素進(jìn)行定性檢測，而后再經(jīng)外標(biāo)或內(nèi)標(biāo)法定量檢測各抗生素；其中，樣品中喹諾酮類抗生素根據(jù)外標(biāo)法定量，其余抗生素根據(jù)內(nèi)標(biāo)法定量計(jì)算；

具體檢測方法為：

（1）將待檢測樣品過濾，加入Na₂EDTA，而后調(diào)節(jié)過濾后水樣pH至3.0；

（2）將步驟（1）中處理后的水樣通過活化后的HLB小柱，對水樣中的抗生素進(jìn)行富集；

（3）用甲醇洗脫富集后的HLB小柱，得到洗脫液并濃縮，復(fù)溶，過濾，收集液相，待測；

（4）采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的C18反相色譜柱，高效液相色譜串聯(lián)紫外-熒光檢測儀對收集液相進(jìn)行檢測；

所述高效液相色譜采用Agilent ZORBAX SB-C18柱，5μm，4.6×150mm，柱溫為25℃，進(jìn)樣體積為10 μL；

流動相A、B、C、D依次分別為甲醇、乙腈、0.02M磷酸水溶液、水，梯度洗脫方式為：0 ~ 2min A:B:C:D=24:4:19:53，2 ~ 3 min A:B:C:D=25:6:15:54，3 ~ 5 min A:B:C:D=24:8:5:63， 5 ~ 22 min A:B:C=24:3:73 ，22 ~ 30 min B:C:D= 35:16:49，30 ~ 37 min B:C:D=30:15:55，37 ~ 50 min A:B:C:D=24:4:19:53，流速為0.2 mL/min；

所述紫外檢測條件為檢測波長為270nm，熒光檢測器激發(fā)波長為280nm，發(fā)射波長為450nm；

（5）經(jīng)保留時間得出各抗生素的峰面積，根據(jù)內(nèi)標(biāo)法或外標(biāo)法標(biāo)準(zhǔn)曲線定量計(jì)算，得出待測樣品中所含抗生素的濃度；

所述多種抗生素為磺胺嘧啶、磺胺吡啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲噁唑、氯霉素、甲氧芐胺嘧啶、氧氟沙星、恩諾沙星、環(huán)丙沙星、諾氟沙星、洛美沙星。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時檢測多種抗生素的方法，其特征在于，所述步驟（1）中采用0.22-0.45μm玻璃纖維濾膜過濾水樣，加入Na₂EDTA使濾液中其終濃度為0.5-0.8g/L。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時檢測多種抗生素的方法，其特征在于，所述步驟（2）中活化HLB小柱的方法是依次用甲醇，超純水， pH = 3.0的鹽酸水溶液進(jìn)行活化洗滌小柱；速度為3-4mL/min。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時檢測多種抗生素的方法，其特征在于，所述步驟（3）中洗脫濃縮的具體方法為：用10 mL超純水對HLB小柱進(jìn)行淋洗，抽真空干燥30 min后，再用12mL甲醇溶液分兩次對HLB小柱進(jìn)行洗脫，收集洗脫液；最后將洗脫液氮吹至近干，加入100μL內(nèi)標(biāo)，秋水仙堿，2mg/L，用0.02M磷酸水溶液定容至1 mL，經(jīng)0.22 μm濾膜過濾，收集液相，待用。