[發(fā)明專利]一種抑制α-葡萄糖苷酶的青錢柳多糖制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011202323.0
• 申請日: 2020-11-02
• 公開（公告）號: CN112321738B
• 公開（公告）日: 2022-05-24
• 發(fā)明（設計）人: 祝子坪;李鈞敏;李娜
• 申請（專利權）人: 臺州學院
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61P3/10
• 代理公司: 浙江永航聯(lián)科專利代理有限公司 33304
• 代理人: 江程鵬

本發(fā)明提供了一種抑制α?葡萄糖苷酶的青錢柳多糖制備方法，屬于生物醫(yī)藥技術領域。本抑制α?葡萄糖苷酶的青錢柳多糖制備方法，先將青錢柳葉日光曬干后粉碎，葉粉依次經(jīng)脫脂、烘干、加水浸泡后進行微波提取；提取液經(jīng)離心和過濾除雜質(zhì)后濃縮，然后進行雙水相萃取，取水相透析除鹽，經(jīng)再次濃縮后用乙醇分級沉淀得多糖沉淀物；多糖沉淀物溶于水，經(jīng)DEAE?52纖維素柱上樣，NaCl溶液洗脫，透析除鹽，濃縮至一定濃度后進行超聲降解，然后濃縮、冷凍干燥得目標產(chǎn)品。本制備方法的成本低，多糖萃取率高，雜質(zhì)少，降解后的多糖對α?葡萄糖苷酶抑制率更高。

技術領域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥技術領域，具體涉及一種抑制α-葡萄糖苷酶的青錢柳多糖制備方法。

技術背景

糖尿病是一種常見的內(nèi)分泌代謝疾病，是由人體內(nèi)分泌系統(tǒng)紊亂導致糖代謝功能失調(diào)，從而使血糖值高出正常水平。近年來，國內(nèi)糖尿病患病率呈逐漸攀升趨勢，據(jù)調(diào)查數(shù)據(jù)顯示在我國糖尿病患病率為9.7％。2019年中國糖尿病患病人數(shù)約為1.16億人，已成為全球糖尿病患病人數(shù)最多的國家。

青錢柳(Cyclocarya Paliurus)又名青錢李、甜茶樹、搖錢樹、一串錢等，屬于雙子葉植物胡桃科，僅存于中國，零散分布在我國南方，混生于海拔500～2500m山地濕潤的常綠林中，是冰川世紀時期幸存下來的珍稀樹種，屬國家二級保護植物。青錢柳枝葉味甘甜，具有清熱消腫、止痛的功效，人們將其芽葉炮制成茶品，俗稱“甜茶”，對已成為人類第二大殺手的高血糖病有著顯著的療效，繼被人們譽為醫(yī)學界的第一棵樹—柳樹與第二棵樹—紅豆杉之后稱為醫(yī)學界的第三棵樹，同時被譽為植物界的大熊貓。據(jù)《中國中藥資源志要》記載，青錢柳樹皮、葉具有清熱消腫、止痛功能。現(xiàn)代醫(yī)學研究成果表明，青錢柳具有明顯的降血糖、降血壓、降血脂及增強免疫力、抗衰老等多種功效，被醫(yī)學界稱為“天然胰島素”。

試驗發(fā)現(xiàn)，青錢柳多糖降血糖作用顯著，不同劑量組均可顯著降低模型組小鼠的Glu、Ins、C肽和Gln，且高劑量組效果更優(yōu)；同時青錢柳多糖可顯著提高小鼠對葡萄糖、淀粉的糖耐量，對蔗糖影響不顯著；有文獻報道HE染色顯示，青錢柳多糖對四氧嘧啶引發(fā)的胰島組織損傷有一定的保護作用。中藥降血糖機制主要從提高胰島素含量、增加胰島素敏感性、抑制葡萄糖的吸收、對受體糖代謝的影響及提高機體自由基清除能力和抗脂質(zhì)過氧化等方面實現(xiàn)。試驗發(fā)現(xiàn)，青錢柳多糖對α-葡萄糖苷酶活性具有顯著的抑制作用，屬于混合非競爭性抑制，是一種高效的α-葡萄糖苷酶抑制劑。α-葡萄糖苷酶抑制劑是一類新型的降糖藥，通過抑制小腸刷狀緣上α-葡萄糖苷酶活性，從而調(diào)節(jié)控制碳水化合物在腸道的吸收，達到防治餐后高血糖癥和緩解高胰島素血癥的目的。

研究發(fā)現(xiàn)，多糖的生物活性與其相對分子量大小有關，相對分子量越大，體積越大，越不利于多糖跨越多重細胞膜障礙而進入生物體內(nèi)發(fā)揮生物學活性；同時，青錢柳多糖作為生物大分子和酶進行結(jié)合時只有部分結(jié)構(gòu)部位能和酶進行結(jié)合，該結(jié)構(gòu)部位即為多糖發(fā)揮功能的核心部位。通過合適的理化方法保留多糖核心部位，降解切除一些非功能部位，有利于多糖功能發(fā)揮，提高其活性。目前多糖降解方法主要包括物理降解法、化學降解法和生物學方法，與其它降解多糖方法相比較，超聲降解法成本低廉，同時節(jié)省能源和時間，操作程序簡便，無需使用有毒有害試劑，基本不產(chǎn)生廢棄物，工業(yè)化前景廣闊。Tang等采用超聲波降解處理青錢柳葉多糖后，與未降解多糖相比，超聲波降解后多糖中糖含量、糖醛酸含量和蛋白含量沒有發(fā)生顯著改變，而其單糖的組成比例發(fā)生了改變，降解后多糖具有更好的DPPH清除活力和羥自由基清除活力。可見，超聲降解青錢柳多糖是可行的，可以降低其分子量，提高生物活性。因此，本專利通過大量試驗探索出用超聲降解青錢柳多糖的生產(chǎn)工藝，該工藝可顯著提高青錢柳多糖對α-葡糖糖苷酶的抑制活性，其產(chǎn)品具有較好的降血糖效果，專利具有較好的應用前景和生產(chǎn)實用性。

發(fā)明內(nèi)容