[發(fā)明專利]一種電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)PSA的納米復(fù)合探針及其制備方法和應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011201477.8
• 申請(qǐng)日: 2020-11-02
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112147201A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-12-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周宏;劉靜;劉樹峰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 青島科技大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N27/327
• 分類號(hào): G01N27/327;G01N27/30;G01N21/76;B82Y15/00;B82Y40/00
• 代理公司: 北京盛詢知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11901
• 代理人: 劉靜

本發(fā)明涉及一種電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)PSA的納米復(fù)合探針及其制備方法和應(yīng)用，所述納米復(fù)合探針以氯化血紅素?石墨烯?金納米花復(fù)合物為載體，通過(guò)表面修飾技術(shù)使其負(fù)載第二抗體和葡萄糖氧化酶，信號(hào)反應(yīng)液含有電化學(xué)發(fā)光物質(zhì)魯米諾和葡萄糖，在ITO玻璃芯片上制備三維金納米結(jié)構(gòu)作為電化學(xué)基底來(lái)修飾一抗，制得捕獲探針。當(dāng)待測(cè)液中出現(xiàn)PSA后，電化學(xué)基底上的一抗、納米復(fù)合探針上的二抗與PSA結(jié)合后，復(fù)合探針被捕獲到電極表面，在氯化血紅素?石墨烯?金納米花復(fù)合物的催化下，加速?gòu)?fù)合探針中的葡萄糖氧化酶催化信號(hào)反應(yīng)液中的葡萄糖與氧氣反應(yīng)生成的過(guò)氧化氫與魯米諾反應(yīng)并產(chǎn)生電化學(xué)發(fā)光信號(hào)，以此實(shí)現(xiàn)對(duì)PSA的高靈敏高選擇性檢測(cè)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及體外檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)PSA的納米復(fù)合探針及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

腫瘤標(biāo)志物是指在惡性腫瘤發(fā)生和增殖過(guò)程中，由腫瘤細(xì)胞異常分泌或脫落，或由機(jī)體因腫瘤反應(yīng)而產(chǎn)生和/或升高的，反映腫瘤存在和生長(zhǎng)的一類物質(zhì)，包括蛋白質(zhì)、激素、酶(同工酶)、多胺及癌基因產(chǎn)物等。在癌癥的臨床研究和實(shí)踐中，腫瘤標(biāo)志物(Tumormarker)在腫瘤普查、診斷、判斷預(yù)后、評(píng)價(jià)治療療效和高危人群隨訪觀察等方面都具有較大的實(shí)用價(jià)值。

前列腺特異性抗原(PSA)自從幾十年前被開(kāi)發(fā)以來(lái)一直作為前列腺癥臨床診斷的主要蛋白類生物標(biāo)志物。PSA在血清中主要以游離PSA和結(jié)合態(tài)PSA存在，游離態(tài)稱為fPSA，結(jié)合態(tài)稱為tPSA，水平在4ng mL^-1或者更低的情況下被認(rèn)為是正常值，而超過(guò)4ng mL^-1被認(rèn)為是危險(xiǎn)值，前列腺癌是目前男性群體中多發(fā)的癌癥，如果在早期就能夠被及時(shí)診斷則可以有效地應(yīng)對(duì)和治療，因此對(duì)這些腫瘤標(biāo)志物的高靈敏高選擇性測(cè)定在臨床研究和診斷上意義非常重大。

但由于癌癥早期體內(nèi)腫瘤標(biāo)志物的含量一般非常低，常規(guī)的檢測(cè)方法很難對(duì)其進(jìn)行精確定量和特異性分析，且易導(dǎo)致假陽(yáng)性和假陰性結(jié)果。例如，酶聯(lián)免疫分析法在當(dāng)前被廣泛采用，但所針對(duì)的患者均是腫瘤發(fā)育到相當(dāng)階段后才能檢出；放射免疫分析法也是腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)的主要方法，但這種方法存在操作復(fù)雜、測(cè)定結(jié)果不穩(wěn)定、試劑保存時(shí)間短、放射性污染、儀器昂貴等諸多缺點(diǎn)。電化學(xué)發(fā)光(ECL)分析法是基于電化學(xué)發(fā)光信號(hào)與被分析物的濃度之間的定量關(guān)系進(jìn)行分析的一種方法，具有靈敏度高、背景低及可控性好等優(yōu)點(diǎn)，且所用儀器簡(jiǎn)單，被廣泛應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)PSA的納米復(fù)合探針及其制備方法和應(yīng)用，以解決上述現(xiàn)有技術(shù)存在的問(wèn)題。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)PSA的納米復(fù)合探針，所述探針為表面負(fù)載有二抗和葡萄糖氧化酶的氯化血紅素-石墨烯-金納米花復(fù)合物。

進(jìn)一步的，所述氯化血紅素-石墨烯的制備方法為：氧化石墨烯分散液加水超聲后，加入氨水溶液、氯化血紅素和水合肼，在60℃條件下保持4h，離心后獲得氯化血紅素-石墨烯復(fù)合物。

進(jìn)一步的，所述氯化血紅素-石墨烯-金納米花復(fù)合物的制備方法為：將所述氯化血紅素-石墨烯復(fù)合物和球形納米金顆粒水溶液混合，加入鹽酸羥胺攪拌，靜置后獲得氯化血紅素-石墨烯-金納米花復(fù)合物。

進(jìn)一步的，電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)PSA的納米復(fù)合探針的制備方法為：將所述氯化血紅素-石墨烯-金納米花復(fù)合物與二抗孵育，離心后分散于PBS緩沖溶液中，再加入GOD攪拌，離心后獲得電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)PSA的納米復(fù)合探針。

根據(jù)上述任一電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)PSA的用于PSA檢測(cè)的納米復(fù)合探針?biāo)苽涞腜SA抗體-PSA-納米復(fù)合探針三層夾心式結(jié)構(gòu)的電極。

本發(fā)明公開(kāi)了以下技術(shù)效果：