[發明專利]一種試劑盒、樣本標記方法、單細胞測序方法

在審

• 申請號: 202011200481.2
• 申請日: 2020-10-30
• 公開（公告）號: CN112280829A
• 公開（公告）日: 2021-01-29
• 發明（設計）人: 方亮;陳煒;崔歡歡;朱瓊花;胡宇慧;李貴鵬
• 申請（專利權）人: 南方科技大學
• 主分類號: C12Q1/6806
• 分類號: C12Q1/6806;C12Q1/6869
• 代理公司: 深圳市世紀恒程知識產權代理事務所 44287
• 代理人: 晏波

本發明技術方案通過設計一種試劑盒，該試劑盒包括帶有生物素標記的樣本標簽序列，樣本標簽序列帶有特異標記樣本的條形碼核苷酸序列，還包括生物素標記的刀豆蛋白A或其類似物，以及用于連接樣本標簽序列和刀豆蛋白A或其類似物的親和素，在單細胞測序混合樣本之前，使用試劑盒對樣本進行預處理，使得連接有樣本標簽序列的刀豆蛋白A或其類似物連接在細胞膜或細胞核膜上，從而使每個樣本的細胞帶有不同的樣本標簽序列，從而在后續的單細胞測序結果中能夠清楚的分辨出細胞來自哪個樣本，該方案操作簡單，成本低，效果好，且能通用于細胞和細胞核的標記，降低單細胞測序的成本。

本申請要求2020年04月07日申請的，申請號為202010268124.3，發明名稱為“一種試劑盒、樣本標記方法、單細胞測序方法”中國專利申請的優先權。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別涉及一種試劑盒、樣本標記方法、單細胞測序方法。

背景技術

單細胞測序技術極大地推進了基因組學領域，通過揭示每個細胞獨特的微妙變化，使不同細胞類型得以精細區分，使得科學家們在單細胞水平進行分子機制研究成為可能。

隨著技術的發展，在單次單細胞測序實驗中，可以同時捕獲1-10萬個的單細胞，由于單次單細胞測序實驗的成本較高，如果要降低每個細胞的測序成本，就只能讓單細胞測序的通量越高。然而，對于某些單細胞測序實驗，少量的細胞便能達到實驗的需求或者測序樣本的細胞數量本身就不多，為了降低成本，現在常用的做法是將不同的單細胞測序樣本混合在一起進行高通量的單細胞測序實驗。

為了在后續分析中準確的區分來自不同單細胞測序樣本的細胞，在混合不同的單細胞測序樣本前必須對細胞進行標記。現在常用的標記方法主要有兩種：其一，通過在細胞中表達特定的核酸標簽；其二，利用帶有特定的核酸標簽的抗體對細胞進行標記。

現在常用的標記方法主要有以下缺點：第一種方法需要對細胞進行長時間的預處理，操作復雜，且不能用于從組織新鮮分離的單細胞。第二種方法需要事前了解不同細胞表面的抗原表達情況，若兩種細胞區分不大則不能使用；此外，該類標簽生產成本高，且不能用于細胞核的標記。

發明內容

本發明的主要目的是提供一種試劑盒，通過該試劑盒標記單細胞測序樣本的方法操作簡單，成本低，效果好，且能通用于細胞和細胞核的標記。

為實現上述目的，第一方面，本發明提出一種試劑盒，包括：

試劑一，所述試劑一包括樣本標簽序列，所述樣本標簽序列包括特異標記樣本的條形碼核苷酸序列，所述條形碼核苷酸序列的任一端連接細胞標簽結合序列，所述樣本標簽序列的任一端標記有生物素或其類似物；

試劑二，所述試劑二包括通過生物素或其類似物標記的刀豆蛋白A或其類似物；

試劑三，所述試劑三包括親和素或其類似物，所述親和素或其類似物用于連接所述試劑一中的生物素或其類似物，以及所述試劑二中的生物素或其類似物。

第二方面，本發明還提出另一種試劑盒，包括：

樣本標簽序列，所述樣本標簽序列包括特異標記樣本的條形碼核苷酸序列，所述條形碼核苷酸序列的任一端連接細胞標簽結合序列，所述樣本標簽序列的任一端標記有生物素或其類似物；

刀豆蛋白A或其類似物與親和素或其類似物的融合蛋白，所述融合蛋白用于與所述樣本標簽序列中的生物素或其類似物連接。

第三方面，本發明還提出又一種試劑盒，包括：

樣本標簽序列，所述樣本標簽序列包括特異標記樣本的條形碼核苷酸序列，所述條形碼核苷酸序列的任一端連接細胞標簽結合序列，所述樣本標簽序列的任一端標記有生物素或其類似物，所述樣本標簽序列通過親和素或其類似物與生物素或其類似物標記的刀豆蛋白A或其類似物連接。