[發(fā)明專利]寡聚核苷酸組、試劑盒及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011194966.5
• 申請日: 2020-10-30
• 公開（公告）號: CN112322784B
• 公開（公告）日: 2023-01-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 馬立新;王瓏瑜;何如怡;呂彬;王飛;王亞平
• 申請（專利權(quán)）人: 湖北大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6858;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 武漢智嘉聯(lián)合知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 42231
• 代理人: 易賢衛(wèi)

本發(fā)明涉及寡聚核苷酸組、試劑盒及其應(yīng)用。該寡聚核苷酸組包括包括四種寡核苷酸分子，分別標(biāo)記為A、B、A’和B’，能夠與目的基因的核酸分子進(jìn)行互補(bǔ)配對。該試劑盒包括該寡聚核苷酸組、分子信標(biāo)、PfAgo酶和DNA連接酶。本發(fā)明利用了PfAgo酶編輯DNA，LCR反應(yīng)良好的特異性和區(qū)分單堿基特異性的能力以及分子信標(biāo)的高靈敏度的特點，對檢測的靶目標(biāo)放大，其檢測靈敏度可以達(dá)到1aM，并且具有好的特異性，還能實現(xiàn)病毒各種亞型的多通道分析，操作也簡單準(zhǔn)確。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子生物學(xué)檢測技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及寡聚核苷酸組、試劑盒及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

SARS-CoV-2具有約30000個核苷酸長度的單鏈正鏈RNA基因組。該基因組編碼27種蛋白質(zhì)，包括一種RNA依賴的RNA聚合酶(RdRP)和4種結(jié)構(gòu)蛋白。SARS-CoV-2的4種結(jié)構(gòu)蛋白包括穗狀表面糖蛋白(S)、小包膜蛋白(E)、基質(zhì)蛋白(M)和核衣殼蛋白(N)。針對該病毒的檢測，目前主要的檢測方法是RT-qPCR，但該方法存在假陽性、假陰性等缺點。假陽性主要是由于PCR方法的特異性，假陰性主要是由于檢測的敏感性。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，有必要提供一種檢測SARS-CoV-2病毒的試劑盒，用以解決RT-qPCR檢測手段存在的諸多問題。

本發(fā)明的第一方面，提供了寡聚核苷酸組，用于對病毒目的基因進(jìn)行LCR擴(kuò)增，包括寡核苷酸分子，分別標(biāo)記為A、B、A’和B’；

若目的基因的核酸分子為雙鏈DNA分子，所述A分子和所述B分子可與雙鏈DNA分子中的一條鏈互補(bǔ)配對，所述分子A’和所述B’分子可與雙鏈DNA分子中的另一條鏈互補(bǔ)配對；

若目的基因的核酸分子為單鏈RNA分子，所述A分子和所述B分子可分別與單鏈RNA分子逆轉(zhuǎn)錄的雙鏈cDNA分子中一條鏈互補(bǔ)配對以形成連接產(chǎn)物，所述A’分子和所述B’分子可分別與所述連接產(chǎn)物進(jìn)行再次互補(bǔ)配對。

具體的，所述B分子、所述A’分子和所述B’分子均帶有磷酸基團(tuán)。

具體的，所述目的基因包括HPV11病毒E6基因、HPV16病毒E6基因、HPV18病毒L1基因、SARS-CoV-2病毒N基因、SARS-CoV-2病毒ORF-1a基因、SARS-CoV-2病毒S基因、SARS-CoV-2病毒突變體S基因、SARS病毒N基因和MERS病毒N基因中的至少一種。

具體的，靶向HPV11病毒E6基因的所述寡聚核苷酸組包括：

11-A：CTGTGGGGGAACCT，如SEQ ID NO.1所示；

11-B：GTGCCTGATGACCT，如SEQ ID NO.2所示；

11-A’：TCATCAGGCAC，如SEQ ID NO.3所示；

11-B’：AGGTTCCCCCA，如SEQ ID NO.4所示；

靶向HPV16病毒E6基因的所述寡聚核苷酸組包括：

16-A：AATGTTTCAGGACCC，如SEQ ID NO.5所示；

16-B：ACAGGAGCGACCCA，如SEQ ID NO.6所示；

16-A’：GGGTCGCTCCTGT，如SEQ ID NO.7所示；

16-B’：GGGTCCTGAAACAT，如SEQ ID NO.8所示；

靶向HPV18病毒L1基因的所述寡聚核苷酸組包括：

18-A：GGATTGCGTCGCAA，如SEQ ID NO.9所示；

18-B：GCCCACCATAGGCC，如SEQ ID NO.10所示；