[發明專利]一種用于煙草根結線蟲防治的堅強芽孢桿菌的發酵制備及應用

在審

• 申請號: 202011192331.1
• 申請日: 2020-10-30
• 公開（公告）號: CN112501050A
• 公開（公告）日: 2021-03-16
• 發明（設計）人: 陳文;安德榮
• 申請（專利權）人: 江西順泉生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/22;A01P5/00;A01G13/00;A01G22/45;C12R1/07
• 代理公司: 北京國坤專利代理事務所(普通合伙) 11491
• 代理人: 趙紅霞

本發明公開了一種用于煙草根結線蟲防治的堅強芽孢桿菌的發酵制備及應用，本發明所用的堅強芽孢桿菌已經保存在中國微生物保藏管理委員會普通微生物中心，編號為CGMCCNo.20169，本堅強芽孢桿菌的發酵制備采用了固體發酵工藝，采用此種發酵技術能夠使其發酵過程加快及其使其菌劑中的活孢子數能夠達到1000億/g，發酵過程主要包括以下：①菌體活化，制得活化菌株；②種子液制備，制得種子液；③發酵培養，發酵步驟完成得到發酵液；④成品制備，制得本發明菌劑。本發明由堅強芽孢桿菌制備，其該菌能夠有效的防治煙草根結線蟲，最終防效能夠達到82.36％，防治效果穩定。

技術領域

本發明屬于農業生物防治領域，具體涉及一種用于煙草根結線蟲防治的堅強芽孢桿菌的發酵制備及應用。

背景技術

根結線蟲是一種土傳植物寄生性線蟲，會引起植物根形成根結根瘤、嚴重時造成根系腐爛，同時還可以引發植物感染其他真菌和細菌性病害。根結線蟲寄主范圍非常廣泛，可寄生于200多種不同的農作物上，特別是是在煙草上危害更重，常常造成35％損失，嚴重時可以造成毀田。

根結線蟲病屬于土壤傳播，防治難度非常大。國際上主要采用化學農藥來防治根結線蟲，通過放學農藥來防治根結線蟲，防效低，持效期短，而且會造成嚴重的環境污染以及對植物本身造成嚴重的傷害，對于長期使用化學農藥，根結線蟲會產生出抗藥性，從而使得防治變得更加困難。隨著大批化學農藥在煙草上被禁止使用后，亟待尋找一些環境友好型的生物菌劑來防治根結線蟲病。

基于此，本發明設計了一種用于煙草根結線蟲防治的堅強芽孢桿菌的發酵制備及應用，以解決上述問題。

發明內容

本發明的目的在于提供一種固體發酵及其處理工藝，以解決上述背景技術中提出的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

一種用于煙草根結線蟲防治的堅強芽孢桿菌，堅強芽孢桿菌已經保存在中國微生物保藏管理委員會普通微生物中心，分類命名：堅強芽孢桿菌；Bacillus firmus；保藏號：CGMCC No.20169；保藏地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號；保藏日期：2020年7月1日。

一種用于煙草根結線蟲防治的堅強芽孢桿菌的發酵制備，包括以下制備步驟：

①菌體活化，將低溫保存的堅強芽孢桿菌至于斜面培養基在23℃下進行恒溫活化培養1d，制得堅強芽孢桿菌的活化菌株；

②種子液制備，挑取活化的堅強芽孢桿菌菌株，接入滅菌后的液體培養基中，130r/min，25℃下恒溫培養48h，制得種子液；

③發酵培養，將步驟②制得的種子液按照體積比為2％接種于滅菌后的發酵罐中在固體培養基中，在120r/min，25℃的恒溫條件下培養72h，當活孢數≥1000億/g時，停止發酵，得到發酵液；

④成品制備，將步驟③制備得到的堅強芽孢桿菌的發酵液，經過細菌計數后，篩選后將活孢子數≥1000億/g的進行包裝保存。

優選地，所述步驟①所述的斜面培養基組分如下均為重量百分比：胰蛋白胨2.5％，酵母浸粉2.0％，氯化1.0％。

優選地，所述步驟②中所述的培養基組分如下，均為重量百分比：胰蛋白胨3.5％，酵母提取物1.0％，氯化鈉1.0％，瓊脂粉3.5％，葡萄糖0.5％，余量為水，PH：7.1。

優選地，所述步驟③中所述的固體培養基組分如下，均為重量百分比：小麥麩3.0％，牛肉膏3.0％，氯化鈉0.5％，磷酸二氫鉀0.3％，葡萄糖1.0％，醋酸鈉0.3％，酵母膏1.0％，余量為水PH：7.2。

優選地，發酵過程采用了固體發酵技術，該技術能夠縮短發酵時間，提高發酵效率，芽孢成功率提高。