[發明專利]表達人源化抗體的非人轉基因動物及其用途

在審

• 申請號: 202011190286.6
• 申請日: 2009-11-30
• 公開（公告）號: CN112626117A
• 公開（公告）日: 2021-04-09
• 發明（設計）人: F.G.格羅斯維爾德;R.W.詹森斯;M.J.范哈佩倫;羅杰·金登·克雷格
• 申請（專利權）人: 伊拉茲馬斯大學鹿特丹醫學中心;羅杰·金登·克雷格
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/13;A01K67/027
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 羅文鋒;林毅斌

1.一種用于產生能夠產生雜交四聚體抗體的轉基因小鼠的方法，所述方法包括：

使小鼠祖細胞的內源重鏈基因座、內源λ輕鏈基因座和內源κ輕鏈基因座突變，其中所述突變包括將移碼突變、多肽編碼序列和/或一個或多個終止密碼子引入各個基因座中，并且其中在內源重鏈基因座中的突變為終止密碼子的引入；

由所述祖細胞產生小鼠，其具有顯著降低或消除的形成包含從所述突變基因座產生的重排重鏈和輕鏈的功能性免疫球蛋白四聚體的能力；和

將異源雜交人/大鼠重鏈和異源雜交人/大鼠輕鏈基因座作為轉基因通過顯微注射引入受精卵中，所述受精卵由所述具有顯著降低或消除的形成包含從所述突變基因座產生的重排重鏈和輕鏈的功能性免疫球蛋白四聚體的能力的小鼠提供，

其中所述異源重鏈轉基因基因座包含含有一個或多個V基因區段、一個或多個J基因區段和一個或多個D基因區段的人可變區、大鼠恒定區和鼠來源的重鏈免疫球蛋白LCR，并且

其中所述異源輕鏈轉基因基因座包含含有異源κ輕鏈基因座和相關B細胞特異性調節元件的轉基因基因座和/或含有λ輕鏈基因座和相關B細胞特異性調節元件的轉基因基因座，并且其中所述異源輕鏈基因座包含含有一個或多個V基因區段和一個或多個J基因區段的人可變區和大鼠恒定區。

2.權利要求1的方法，其中引入超過一個不同的轉基因重鏈基因座。

3.權利要求1或2的方法，其中所述祖細胞是胚胎干細胞。

4.前述權利要求中任一項的方法，其中一個或各個異源重鏈基因座包含4個或更多個V基因區段。

5.權利要求4的方法，其中一個或各個異源重鏈基因座包含4個大鼠恒定區和4個人V_H區段1-46、3-53、3-23和3-11。

6.權利要求4的方法，其中一個或各個異源重鏈基因座包含18個V基因區段。

7.權利要求6的方法，其中一個或各個異源重鏈基因座包含5個大鼠恒定區和18個人V_H區段6-1、1-2、4-4、2-5、3-07、1-8、4-39、3-15、1-18、3-23、3-30、3-33、3-48、4-34、3-49、3-53、4-59和1-69；任選地，所述18個人V_H區段分別位于兩個或更多個不同的異源重鏈基因座；任選地，所述異源重鏈基因座還包含多個人D區段、多個人J區段以及小鼠來源的LCR。

8.前述權利要求中任一項的方法，其中所述異源κ輕鏈基因座包含多個人J區段、小鼠增強子區、大鼠恒定區Cκ和至少5個人Vκ區段4-1、3-11、3-15、3-20和1-39。

9.權利要求8的方法，其中所述異源κ輕鏈基因座包含11個Vκ區段4-1、3-11、3-15、3-20、1-39、1-9、1-33、2-30、2-28、1-27和1-5。

10.前述權利要求中任一項的方法，其中所述異源λ輕鏈基因座包含4個人Vλ區段、2個大鼠Cλ區段和2個人Jλ區段以及小鼠來源的LCR。

11.前述權利要求中任一項的方法，其中所述內源λ輕鏈基因座、內源κ輕鏈基因座和內源重鏈基因座中的至少一個基因座的表達通過剔除某基因座或各基因座上的部分或全部LCR而顯著減少。

12.權利要求11的方法，其中所述內源λ輕鏈基因座的部分或全部LCR被剔除以使內源λ輕鏈基因表達顯著減少；和/或

其中所述內源κ輕鏈基因座的部分或全部LCR被剔除以使內源κ輕鏈基因表達顯著減少。

13.前述權利要求中任一項的方法，其中對所述內源κ輕鏈基因座引入移碼突變以使所述內源κ輕鏈基因表達顯著減少；優選地，其中所述移碼突變在所述內源κ輕鏈基因座的κ恒定區中。