[發(fā)明專利]在生物體內(nèi)創(chuàng)制新基因的方法及應(yīng)用

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202011190279.6
• 申請日: 2020-10-30
• 公開（公告）號: CN112779266A
• 公開（公告）日: 2021-05-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 姜臨建;王繼堯;莫蘇東;陳波;李華榮
• 申請（專利權(quán)）人: 青島清原化合物有限公司
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C12N15/82;A01H5/00;A01H6/46
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種在生物體內(nèi)創(chuàng)制新基因的方法，其特征在于，包括以下步驟：

在生物體基因組中至少兩個不同的特定位置上同時產(chǎn)生DNA斷裂，其中所述特定位置是能夠分割不同基因元件或不同蛋白結(jié)構(gòu)域的基因組位點，所述DNA斷裂通過非同源末端連接(NHEJ)或同源修復(fù)的方式互相連接，產(chǎn)生所述不同基因元件或不同蛋白結(jié)構(gòu)域之間不同于原始基因組序列的新組合，形成新基因。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的“至少兩個不同的特定位置”可以位于同一條染色體上，也可以位于不同染色體上。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述的“至少兩個不同的特定位置”可以在至少兩個不同基因上的特定位置，也可以在同一基因上的至少兩個不同的特定位置。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述的“至少兩個不同基因”的轉(zhuǎn)錄方向可以相同，也可以不同。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任意一項所述的方法，其特征在于，所述的“DNA斷裂”是通過將具有靶向特性的核酸酶遞送到生物體細胞內(nèi)與基因組DNA特定位置接觸實現(xiàn)的。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述的“具有靶向特性的核酸酶”為Meganuclease、Zinc finger nuclease、TALEN或CRISPR/Cas系統(tǒng)。

7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的方法，其特征在于，所述“具有靶向特性的核酸酶”以DNA形式存在。

8.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的方法，其特征在于，所述“具有靶向特性的核酸酶”以mRNA或蛋白形式存在，而非DNA形式。

9.根據(jù)權(quán)利要求5-8任意一項所述的方法，其特征在于，將具有靶向特性的核酸酶遞送到細胞內(nèi)的方法選自1)PEG介導(dǎo)的細胞轉(zhuǎn)染的方法；2)脂質(zhì)體介導(dǎo)的細胞轉(zhuǎn)染的方法；3)電擊轉(zhuǎn)化的方法；4)顯微注射；5)基因槍轟擊；或6)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化方法。

10.根據(jù)權(quán)利要求1-9任意一項所述的方法，其特征在于，所述“基因元件”包括基因的啟動子、5’非編碼區(qū)、編碼區(qū)或非編碼RNA區(qū)、3’非編碼區(qū)和終止子。

11.根據(jù)權(quán)利要求1-10任意一項所述的方法，其特征在于，所述不同基因元件的組合為兩個具有不同表達模式的基因其中之一的啟動子和另一基因的編碼區(qū)或非編碼RNA區(qū)的組合。

12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其特征在于，所述不同基因元件的組合中一個為生物內(nèi)源強啟動子，另外一個為HPPD、EPSPS、PPO或GH1基因編碼區(qū)。

13.根據(jù)權(quán)利要求1-10任意一項所述的方法，其特征在于，所述不同基因元件的組合為兩個具有不同表達模式的基因其中之一的啟動子至5’非編碼區(qū)和另一基因的編碼區(qū)或非編碼RNA區(qū)的組合。

14.根據(jù)權(quán)利要求11或13所述的方法，其特征在于，所述“不同表達模式”為基因表達水平強弱的差異。

15.根據(jù)權(quán)利要求11或13所述的方法，其特征在于，所述“不同表達模式”為基因表達組織特異性的差異。

16.根據(jù)權(quán)利要求11或13所述的方法，其特征在于，所述“不同表達模式”為基因表達發(fā)育時期特異性的差異。

17.根據(jù)權(quán)利要求1-10任意一項所述的方法，其特征在于，所述不同基因元件的組合為同一基因內(nèi)相鄰基因元件的組合。