[發明專利]一種以聚多巴胺包菊花金納米粒子為信標載體制備的免疫層析試紙條

在審

• 申請號: 202011189996.7
• 申請日: 2020-10-30
• 公開（公告）號: CN112345753A
• 公開（公告）日: 2021-02-09
• 發明（設計）人: 賴衛華;熊勇華;章鋼剛;彭娟;李響敏;劉文娟;伍燕華
• 申請（專利權）人: 江西維邦生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/543;G01N33/532;G01N33/53;G01N33/569;G01N33/576;G01N33/76
• 代理公司: 南昌邁恩知識產權代理事務所(普通合伙) 36139
• 代理人: 徐克寒

本發明提供了一種以聚多巴胺包菊花金納米粒子(AuNC@PDA)為信標載體制備的免疫層析試紙條，在底板上依次搭接粘貼濾紙、樣本墊、AuNC@PDA標記抗體復合物玻璃纖維墊、噴涂有檢測線和質控線的硝酸纖維素膜和吸水紙，制成免疫層析試紙條，用于定量檢測樣本中的待測物濃度，制得的試紙條具有穩定性高、檢測靈敏度高的特點。

技術領域

本發明屬于醫學檢驗和食品安全檢測領域，具體涉及一種以聚多巴胺包菊花金納米粒子(AuNC@PDA)為信標載體制備的免疫層析試紙條，來定量檢測樣本中的待測物濃度。

背景技術

免疫層析技術是一種基于抗原抗體特異性反應的檢測方法，具有檢測速度快、特異性好、操作簡單和費用低等優點，相比于其它方法更能滿足現場大批量檢測的需求，因此近年來發展迅猛，被廣泛應用于食品安全、醫學檢驗和環境污染物監測等領域。其中膠體金免疫層析試紙條是應用最廣泛的一種免疫層析產品，但其靈敏度較差且易受基質干擾。因此近年來的免疫層析技術主要有三個發展方向：一是采用免疫磁分離富集技術從復雜基質中分離濃縮目標物以避免樣品基質的干擾；二是通過信號放大系統(如生物素-鏈霉親和素系統等)以提高免疫層析方法的靈敏度；三是采用新型標記物(如熒光微球)，提高信號輸出或轉變信號輸出類型，以達到提高靈敏度的目的。

金花(AuNF)一般具備多枝結構，相比于傳統的膠體金具有更大的比表面積、光吸收和酶催化活性，因而廣泛應用于傳感器探針領域。然而，傳統的金花一般經由復雜的種子生長兩步法合成，并且合成的金花粒徑均一性不高，限制了金花的開發與應用。此外，作為納米探針，金花的光學性質是其關鍵參數，直接影響了檢測方法的靈敏度，而光學性質由金花枝杈的特性決定。因此，簡易合成均勻的具備復雜多枝結構的金花納米粒子是十分有必要的。

穩定性和生物相容性是納米探針的另外兩個重要參數。穩定性決定了檢測方法的可靠性以及檢測產品的儲存期；生物相容性影響了納米探針與識別分子的偶聯，從而影響方法的普適性。一般地，探針表面修飾一層生物膜是很好的提高探針穩定性和生物相容性的策略，最早發現于貽貝中的聚多巴胺即是很好的生物膜材料，它可以修飾在任意材料的表面，同時具有很好的穩定性和生物相容性，因而被廣泛用作納米材料表面修飾。

基于上述情況，發明人通過一鍋法合成了一種聚多巴胺包裹的復雜花狀金納米粒子—聚多巴胺包菊花金納米粒子(AuNC@PDA)作為探針，應用于醫學檢驗和食品安全快速檢測等領域并提高試紙條穩定性和檢測靈敏度。目前，尚未有將AuNC@PDA作為探針應用于免疫層析法中的相關報道。

發明內容

本發明的一個目的是提供一種以AuNC@PDA為信標載體制備的免疫層析試紙條。

本發明的另一個目的是提供上述試紙條的制備方法。

為了實現上述目的，本發明采取的技術方案如下：

本發明提供了一種以AuNC@PDA為信標載體制備的免疫層析試紙條，它包括底板以及在底板上搭接粘貼的濾紙、樣本墊、玻璃纖維墊、硝酸纖維素膜和吸水紙，其中，所述玻璃纖維墊包被有AuNC@PDA標記抗體的復合物，該玻璃纖維墊的制備方法包括如下步驟：

(1)AuNC@PDA的制備：將3.6～18mL鹽酸多巴胺(4mg/mL)溶于72mL Tris-HCl緩沖溶液(0.01～0.1M,pH 7～10)中，于劇烈攪拌下，加入5.4～22mL氯金酸溶液(0.1％，w/v)與之避光反應15-40h。反應結束后離心(轉速為4000～15000r/min，時間為10～30min)取沉淀物，清洗沉淀物后將沉淀物復溶于磷酸鹽緩沖溶液(0.01～0.05M，pH 6～8)中，即制得AuNC@PDA；

(2)AuNC@PDA標記抗體的制備：向制得的AuNC@PDA中加入待標記抗體，混勻后，室溫攪拌反應2h，之后，加入封閉劑，室溫反應2h，離心取沉淀，得到的沉淀復溶，制成AuNC@PDA復合物；