[發(fā)明專利]一種誘導(dǎo)天門冬叢生芽增殖與植株再生的方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202011189941.6 | 申請日： | 2020-10-30 |
| 公開（公告）號： | CN112273231A | 公開（公告）日： | 2021-01-29 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 張明生;李林;李揚;楊寧線;高燕燕;杭燁 | 申請（專利權(quán)）人： | 貴州大學(xué) |
| 主分類號： | A01H4/00 | 分類號： | A01H4/00 |
| 代理公司： | 日照市聚信創(chuàng)騰知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 37319 | 代理人： | 輝雪瑛 |
| 地址： | 550025 貴*** | 國省代碼： | 貴州;52 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 誘導(dǎo) 天門冬 叢生 增殖 植株 再生 方法 | ||
本發(fā)明公開了一種誘導(dǎo)天門冬叢生芽增殖與植株再生的方法，以種子無菌萌發(fā)苗的帶腋芽莖段為外植體進行腋芽誘導(dǎo)、叢生芽增殖、生根培養(yǎng)、煉苗移栽獲得天門冬植株再生。采用本發(fā)明的方法，腋芽誘導(dǎo)率可達85.05％，叢生芽增殖倍數(shù)達3.65，生根率達78.27％，移栽成活率達87.10％，能有效降低生產(chǎn)成本，縮短組培快繁周期，可在天門冬規(guī)模化種苗繁育及資源保護中加以應(yīng)用。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，涉及一種誘導(dǎo)天門冬叢生芽增殖與植株再生的方法。
技術(shù)背景
天門冬Asparagus cochinchinensis(Lour.)Merr.為百合科天門冬屬多年生攀援草本植物，別名天冬、天冬草、大當門根等；天門冬始載于東漢《神農(nóng)本草經(jīng)》，以其干燥塊根入藥，具有滋陰潤燥、清肺降火之功效，主治燥熱咳嗽、陰虛癆嗽、熱病津傷、內(nèi)熱消渴、腸燥便秘、咽喉腫痛等癥。天門冬在我國藥用歷史悠久，同時集藥用、食用、觀賞價值與一身，其開發(fā)利用前景廣闊。
近年來，因人們無節(jié)制的濫采濫挖，致使天門冬野生資源資源急劇下降，已被列為國家三級重點保護野生藥材物種。因此，開展天門冬人工種植，對保護天門冬野生資源并實現(xiàn)其永續(xù)利用具有重要意義。目前，天門冬種苗的繁殖主要以種子繁殖與分株繁殖為主，但存在育苗周期長、繁殖倍數(shù)低、生產(chǎn)成本高等問題，難以滿足規(guī)模化生產(chǎn)需求。通過組織培養(yǎng)手段可以建立天門冬的種苗快繁技術(shù)，尤其是本課題組研究建立的叢生芽增殖與植株再生技術(shù)，已為實現(xiàn)天門冬種苗的產(chǎn)業(yè)化奠定了良好基礎(chǔ)。
發(fā)明內(nèi)容
有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種誘導(dǎo)天門冬叢生芽增殖與植株再生的方法，克服現(xiàn)有技術(shù)中外植體誘導(dǎo)困難、叢生芽增殖效率低等問題。
為了實現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，本發(fā)明提供了一種誘導(dǎo)天門冬叢生芽增殖與植株再生的方法，以種子無菌萌發(fā)苗的帶腋芽莖段為外植體進行腋芽誘導(dǎo)、叢生芽增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、煉苗與移栽。具體步驟如下：
(1)種子處理與萌發(fā)成苗：選取成熟飽滿的天門冬種子，用98％濃硫酸浸泡4-6min，35℃溫水浸泡4-6h；置于超凈工作臺上再依次用75％酒精浸泡0.5-1min、0.1％升汞浸泡10-12min、無菌水沖洗3-5次備用；將種子接種于成苗培養(yǎng)基上，在溫度25±2℃，光照強度為2500-3000lx，光照時間為12h/d培養(yǎng)條件下，誘導(dǎo)種子產(chǎn)生無菌萌發(fā)苗，其種子萌發(fā)成苗培養(yǎng)基為：MS+GA30.5 mg/L+6-BA 1.0mg/L+KT 0.1mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂7g/L，pH5.8-6.0；
(2)腋芽萌發(fā)：選取生長健壯的芽苗，切取帶腋芽莖段，接入腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基，腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：MS+NAA 0.1mg/L+6-BA 1.0mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂7g/L，pH5.8-6.0。培養(yǎng)條件同種子萌發(fā)(下同)；
(3)叢生芽增殖：切下腋芽萌發(fā)的單芽或叢生芽，接入增殖培養(yǎng)基上，增殖培養(yǎng)基為：MS+6-BA0.5 mg/L+KT 1.5mg/L+IAA 1.5mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂7g/L，pH5.8-6.0。如增殖培養(yǎng)過程中出現(xiàn)褐化現(xiàn)象，則在增殖培養(yǎng)基中添加0.5g/L的聚乙烯吡咯烷酮(PVP)繼代培養(yǎng)；
(4)生根培養(yǎng)：當叢生芽生長到3cm以上時，切下2-3個芽的芽塊接種于生根培養(yǎng)基上進行生根培養(yǎng)，生根培養(yǎng)基為：1/2MS+PUT 1.0mg/L+IAA 1.5mg/L+IBA 1.5mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂7g/L，pH5.8-6.0；當生根過程中出現(xiàn)褐化現(xiàn)象時，在生根培養(yǎng)基中添加0.5g/L的活性炭(AC)；
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