[發明專利]貝類中麻痹性貝類毒素的液相色譜-串聯質譜檢測方法

在審

• 申請號: 202011186101.4
• 申請日: 2020-10-30
• 公開（公告）號: CN112379015A
• 公開（公告）日: 2021-02-19
• 發明（設計）人: 劉建軍;黃柏強;黃科;張建瑩;陳效;周彥
• 申請（專利權）人: 深圳市疾病預防控制中心（深圳市衛生檢驗中心;深圳市預防醫學研究所）;深圳海關食品檢驗檢疫技術中心
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/08;G01N30/14;G01N30/86
• 代理公司: 深圳市添源知識產權代理事務所(普通合伙) 44451
• 代理人: 黎健任

本發明提供貝類中麻痹性貝類毒素的液相色譜?串聯質譜檢測方法，包括如下步驟：1.1試樣提取：貝類試樣加入甲酸溶液，超聲提取，離心，取上清液，定容，得到試樣提取液；1.2 試樣凈化：所述試樣提取液加入二氯甲烷，混勻，離心，取上清液加入已活化的C18固相萃取柱中，洗脫，收集流出液與洗脫液，合并后定容，靜置，離心，取上清液過濾膜，得到試樣檢測液；1.3 試樣檢測：取所述試樣檢測液，進行液相色譜?串聯質譜檢測，外標法定量。本發明屬于食品安全檢測技術領域，簡化了操作，減少了有機溶劑消耗，試樣的凈化效果好，無需超濾步驟，同時還實現了PSTs中部分結構類似物的有效分離和檢測，拓寬了對PSTs的檢測種類。

技術領域

本發明屬于食品安全檢測技術領域，尤其涉及貝類中麻痹性貝類毒素的液相色譜-串聯質譜檢測方法。

背景技術

貝類毒素通常指經由貝類富集和傳遞的海洋生物毒素。根據已有的記錄癥狀和染毒的媒介，可將海洋生物毒素導致的中毒分為麻痹性貝類中毒(Paralytic ShellfishPoisoning，PSP)、神經性貝類中毒(Neurotoxic Shellfish Poisoning，NSP)、記憶缺失性貝類中毒(Amnestic Shellfish Poisoning，ASP)、腹瀉性貝類中毒(DiarrheticShellfish Poisoning，DSP)和西加魚中毒(Ciguatera Fish Poisoning，CFP)。

麻痹性貝類毒素(Paralytic shellfish toxins，PSTs)，可以累積在濾食性雙殼軟體類和甲殼類等水生生物體內，是目前世界上分布最廣、危害最大的一類海洋生物毒素。PSTs易溶于水，具有熱穩定性和酸穩定性，是四氫嘌呤的衍生物，其基本結構為根據R基團的不同，可將PSTs分為以下四類：1)氨基甲酸酯類毒素(Carbamate toxins)，包括石房蛤毒素(STX)、新石房蛤毒素(neoSTX)和膝溝藻毒素1-4(GTX1、GTX2、GTX3、GTX4)；2)脫氨甲酰基類毒素(decarbamoyl toxins)，包括dcSTX、dcNEO和dcGTX1-4(dcGTX1、dcGTX2、dcGTX3、dcGTX4)；N－磺酰氨甲酰基類毒素(N-sulfocarbamoyl toxins)，包括GTX5、GTX6和C1-4(C1、C2、C3、C4)；脫氧脫氨甲酰基類毒素(deoxydecarbamoyl toxins)，包括DodcSTX、DodcGTX2和DodcGTX3。部分PSTs的具體信息如表1所示：

表1部分PSTs的名稱、簡稱及對應的R基團表

人類食用受到該毒素污染的海產品往往會引起麻痹性貝類中毒，據統計，全球由海洋生物毒素導致的中毒事件中，80％以上是由PSTs引起的。因此，進行PSTs的檢測，對于保障食品安全和公共衛生安全具有重要意義。

當前，用于貝類中麻痹性貝類毒素的檢測方法主要包括：小鼠生物法、酶聯免疫吸附法、高效液相色譜法和液相色譜-串聯質譜法(LC-MS/MS)。國家標準《GB 5009.213-2016食品安全國家標準貝類中麻痹性貝類毒素的測定》對麻痹性貝類毒素的小鼠生物法、酶聯免疫吸附法、高效液相色譜法和液相色譜-串聯質譜法(LC-MS/MS)進行了規定。其中，液相色譜-串聯質譜法，同時具備高效液相色譜強大的分離功能和質譜準確的定性能力，具有重復性好、靈敏度高、準確性好等優點，其檢測原理和主要步驟包括：試樣經甲酸溶液(0.5％)超聲提取，先后經乙酸乙酯和三氯甲烷液-液分配去脂，經HLB固相萃取柱凈化后，再經乙腈去除蛋白，超濾離心后進行檢測，色譜-串聯質譜的檢測條件包括：采用親水性氨基甲酰鍵合凝膠柱，以甲酸銨緩沖溶液(5mmol/L)為流動相A，以酸化乙腈(0.5％)為流動相B，進行按特定程序梯度洗脫35min，采用電噴霧離子源，正離子掃描和多反應監測模式，實現了STX、dcSTX、GTX1、GTX2、GTX3、GTX4、GTX5、dcGTX2、dcGTX3和NEO這10種麻痹性貝類毒素的檢測。然而，該液相色譜-串聯質譜法的除脂步驟較為繁瑣，需要消耗大量的乙酸乙酯等有機溶劑，且能定量檢測的PSTs成分種類較有限。