[發(fā)明專利]一種抗HPV E6的單克隆抗體及其細(xì)胞株和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011185206.8
• 申請(qǐng)日: 2020-10-30
• 公開（公告）號(hào): CN112458061B
• 公開（公告）日: 2022-03-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 路春桃;祝芬;馬宸;喻長(zhǎng)發(fā)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 武漢呵爾醫(yī)療科技發(fā)展有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/20
• 分類號(hào): C12N5/20;C07K16/08;G01N33/577;G01N33/569;C12R1/91
• 代理公司: 湖北天領(lǐng)艾匹律師事務(wù)所 42252
• 代理人: 楊建軍

本發(fā)明公開了一種抗HPV E6的單克隆抗體及其細(xì)胞株和應(yīng)用，涉及生物檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。所述抗HPV E6的單克隆抗體由保藏號(hào)為CCTCC NO:C2020149或CCTCC NO:C2020153的雜交瘤細(xì)胞株分泌得到，本發(fā)明還提供所述單克隆抗體在制備HPV E6蛋白檢測(cè)試劑盒中的應(yīng)用。本發(fā)明提供的單克隆抗體能夠與多種HPV類型的E6蛋白結(jié)合，特異度強(qiáng)，可用于人HPV E6蛋白檢測(cè)，提高宮頸癌篩查的特異度，減少漏診，避免過度診療。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種抗HPV E6的單克隆抗體及其細(xì)胞株和應(yīng)用。

背景技術(shù)

宮頸癌是所有癌癥中目前唯一明確病因的癌癥，其主要原因?yàn)楦呶Ｐ虷PV的持續(xù)感染。據(jù)報(bào)道，女性罹患宮頸癌呈逐年上升趨勢(shì)，宮頸癌已經(jīng)成為威脅女性健康的重要疾患，由此造成的生活質(zhì)量的降低以及死亡已經(jīng)引起世界衛(wèi)生組織的關(guān)注。因此，宮頸癌的早期診斷以及預(yù)防顯得越來越重要。在一些發(fā)達(dá)國(guó)家，宮頸癌的早期篩查已經(jīng)普及。其原因歸功于巴氏涂片的廣泛應(yīng)用，從而極大地推動(dòng)了宮頸癌篩查項(xiàng)目的進(jìn)展，然而該項(xiàng)技術(shù)本身存在局限性，影響了臨床診斷效果，如所取的細(xì)胞量不穩(wěn)定，診斷結(jié)果受取材的影響而不能重復(fù)等。近年來隨著液基細(xì)胞學(xué)的臨床應(yīng)用使細(xì)胞量不足的問題得到了改善，然而其與巴氏涂片一樣要依賴細(xì)胞病理學(xué)醫(yī)生的主觀判斷，而細(xì)胞病理學(xué)醫(yī)生的診斷水準(zhǔn)不盡一致，從而降低了細(xì)胞學(xué)診斷的敏感性。并且，由于細(xì)胞學(xué)形態(tài)異常改變發(fā)生比較晚，不能早期預(yù)示病變情況，制約了其早期診斷意義。基于以上種種因素，HPV的檢測(cè)就成為了宮頸癌早期篩查的切入點(diǎn)，這也被國(guó)內(nèi)外同行所認(rèn)可。

隨著HPV HC2方法的普及，其高的檢測(cè)敏感性以及檢測(cè)的穩(wěn)定性使之成為美國(guó)FDA認(rèn)證的檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)，其對(duì)宮頸癌的篩查起到了不可替代的作用。然而，由于HPV存在的普遍性和的終生累計(jì)感染風(fēng)險(xiǎn)已經(jīng)達(dá)到了80%， 使得該方法對(duì)宮頸病變?cè)\斷的特異性降低。有很多報(bào)道顯示，其檢測(cè)的特異性較低，容易引起假陽性，其結(jié)果往往會(huì)給臨床醫(yī)生進(jìn)一步治療帶來困惑，相當(dāng)一部分醫(yī)師會(huì)采取過度的治療方式，這樣會(huì)給病人的身體和心理帶來許多的傷害。特異性不高的根本原因在于感染普遍性，以及感染后有一過性消除的特點(diǎn)，檢測(cè)陽性結(jié)果只能證明曾經(jīng)有過的感染，目前體內(nèi)是否已經(jīng)清除病毒，是否持續(xù)感染，這些并不能得到證實(shí)。即使病毒依然存在于體內(nèi)，其是否整合入宿主基因中，是否會(huì)導(dǎo)致上皮內(nèi)病變，是否有活性的復(fù)制與轉(zhuǎn)錄，都無法從的實(shí)驗(yàn)結(jié)果中判讀出來，因而方法也存在局限性。在這樣的前提下，檢測(cè)是否能夠成為一個(gè)新的生物標(biāo)記，其所檢測(cè)的是否可以反映當(dāng)前體內(nèi)病毒的活性情況，從而對(duì)臨床起到更大指導(dǎo)意義成為一個(gè)值得探討的問題。

環(huán)狀HPV基因組包括七個(gè)早期區(qū)和兩個(gè)晚期區(qū)，其中，由E6、E7基因編碼的致癌蛋白是導(dǎo)致宮頸上皮癌變的重要因子。在HPV感染的最初階段，HPV病毒會(huì)隨著細(xì)胞凋亡而被清除，但若HPV病毒持續(xù)感染，可能會(huì)導(dǎo)致病毒隨機(jī)將E6E7基因整合入宿主細(xì)胞中，進(jìn)而引起E6/E7癌蛋白的過度表達(dá)。

E6癌蛋白通過E6AP復(fù)合物與細(xì)胞凋亡因子p53結(jié)合，使p53降解，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡程序失控，因此， E6癌蛋白是宮頸上皮癌變的最重要的生物標(biāo)志物，與晚期腫瘤有密切關(guān)系。

2015年CFDA批準(zhǔn)的Aptima HPV E6 mRNA檢測(cè)是E6作為宮頸癌篩查特異性生物標(biāo)志物應(yīng)用的重要里程碑。然而，mRNA體內(nèi)易于降解，其檢測(cè)需要昂貴的儀器、嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)室環(huán)境及繁瑣的程序，因此基于E6 mRNA檢測(cè)的測(cè)試可能在常規(guī)婦科實(shí)踐中具有有限的臨床應(yīng)用。 而基于E6或E6蛋白檢測(cè)的試劑將比檢測(cè)HPV DNA或HPV E6 mRNA具有優(yōu)勢(shì)，而目前市面上僅有針對(duì)HPV 16，18等幾種HPV類型的E6蛋白檢測(cè)試劑，并不能滿足宮頸癌篩查的需求。

因此，有必要研究一種新的HPV E6蛋白檢測(cè)試劑盒，滿足多種HPV類型同時(shí)檢測(cè)的同時(shí)，提高宮頸癌篩查的特異度，減少漏診，避免過度診療。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種HPV E6蛋白檢測(cè)試劑盒，能夠同時(shí)檢測(cè)多種HPV類型的E6蛋白檢測(cè)試劑盒，提高宮頸癌篩查的特異度，減少漏診，避免過度診療。