[發(fā)明專利]胰腺癌外泌體的捕獲方法及人工智能早期篩查的體外方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011184763.8
• 申請日: 2020-10-29
• 公開（公告）號(hào): CN112375736A
• 公開（公告）日: 2021-02-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉先苗;劉先春
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳玄鳥生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/09
• 分類號(hào): C12N5/09;C12Q1/6886;C12Q1/6858
• 代理公司: 深圳市深聯(lián)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 44357
• 代理人: 黃立強(qiáng)

1.一種胰腺癌外泌體的捕獲方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1.以正常人和PDAC患者的外周血，篩選特異性外泌體表面蛋白質(zhì)；

S2.以分子標(biāo)志物CLDN4、EPCAM、CD151為基礎(chǔ)組合，以抗原抗體相互結(jié)合原理，生產(chǎn)CLDN4、EPCAM、CD151分子的單克隆抗體，特異性結(jié)合外泌體來自PDAC的外泌體；

S3.設(shè)計(jì)耦合上述分子組合標(biāo)志物的外泌體免疫捕獲系統(tǒng)，高效富集PDAC來源的外泌體。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的胰腺癌外泌體的捕獲方法,其特征在于，還包括S4.將抗體結(jié)合在磁珠上，使磁珠成為抗體的載體。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的胰腺癌外泌體的捕獲方法，其特征在于，還包括S5.用洗脫步驟收集游離的外泌體。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的胰腺癌外泌體的捕獲方法,其特征在于，S1中，外周血采集使用肝素抗凝管或者使用不抗凝的采血管靜置5-10分鐘后，3000轉(zhuǎn)/分低速離心15分鐘后，取上清液備用轉(zhuǎn)移至新的無RNA酶的EP管中備用，如需長期保存，-80℃液氮保存。

5.一種人工智能早期篩查胰腺癌的體外方法，其特征在于，包括權(quán)利要求3或4所述的胰腺癌外泌體的捕獲方法的S1-S5步驟，還包括：

S6.對獲取的正常人和PDAC患者的外周血外泌體，進(jìn)行RNA測序獲得數(shù)據(jù)，隨后利用人工智能深度學(xué)習(xí)，通過對比正常人和患者的外泌體RNA序列，得出可以進(jìn)行早篩的算法；

S7.利用微滴式數(shù)字PCR檢測exoDNA的KRAS、TP53、CDKN2A、SMAD4、BRCA1/2、MLH1、ATM、和GPC1的pannel基因突變，并對其進(jìn)行加權(quán)計(jì)算，建立對高危人群的早篩數(shù)據(jù)庫，建立一套基于外泌體的人工智能腫瘤早篩篩查系統(tǒng)。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的人工智能早期篩查胰腺癌的體外方法，其特征在于，S7中，基因突變pannel權(quán)重如下：KRAS的權(quán)重50％、TP53的權(quán)重20％、CDKN2A的權(quán)重10％、SMAD4的權(quán)重5％、BRCA1/2的權(quán)重5％、GPC1的權(quán)重4％、MLH1的權(quán)重3％、ATM的權(quán)重3％。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的人工智能早期篩查胰腺癌的體外方法，其特征在于，S7中，如檢測到基因存在突變，累計(jì)權(quán)重≥55％，結(jié)果為陽性，否則為陰性。