[發明專利]一種毛細管電泳檢測DNA四面體載藥系統的方法

有效

• 申請號: 202011179201.4
• 申請日: 2020-10-29
• 公開（公告）號: CN112251488B
• 公開（公告）日: 2023-07-25
• 發明（設計）人: 洪婷婷;賈文靜;鄭榮會;蘭敏;巢胡斐;邱琳;周舒文;崔朋飛;王程;王建浩;蔣鵬舉
• 申請（專利權）人: 常州大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;G01N27/447;G01N21/64
• 代理公司: 常州市英諾創信專利代理事務所(普通合伙) 32258
• 代理人: 謝新萍

本發明公開了一種毛細管電泳檢測DNA四面體載藥系統的方法，屬于生物分析領域。首先將4條DNA單鏈等摩爾濃度混合，經過變質過程，形成DNA四面體結構。然后向DNA四面體中加入藥物，在室溫、避光的條件下進行共孵育。通過毛細管電泳，經熒光光譜儀對DNA四面體以及DNA四面體?藥物復合物在毛細管中進行在線檢測。上述技術方案操作簡單，可重復性高，建立了一種新的高靈敏的DNA四面體載藥系統的檢測技術。

技術領域

本發明屬于納米生物技術領域，具體涉及一種毛細管電泳檢測DNA四面體載藥系統的方法。

背景技術

近年來，DNA納米材料基于其良好的生物相容性和納米級可控制性等優點被進一步應用于生物成像、生物傳感和藥物遞送。DNA四面體具有良好的結構剛性，因其制備方法簡單、細胞毒性低，及具有良好的生物相容性而備受關注，其在抗腫瘤藥物遞送方向具有獨特的優勢。

毛細管電泳作為一種快速有效、高靈敏、低樣品消耗的技術，在生物分析領域有著廣闊的應用前景。同時，將熒光檢測與毛細管電泳相結合，大大擴寬了毛細管電泳技術的應用。

DNA四面體藥物遞送系統常用于抗腫瘤治療，檢測藥物是否成功載入四面體對于構建抗腫瘤遞藥系統具有重要意義。DNA四面體載藥系統檢測現采用離心法沉淀納米材料，測定上清液中游離藥物間接反映DNA四面體與藥物的結合情況，不能更直觀反映DNA四面體的載藥情況，并且不能同時檢測DNA四面體及其載藥系統。

發明內容

本發明的目的在于解決現有技術中無法同時檢測DNA四面體及其載藥系統的問題，提供一種毛細管電泳檢測DNA四面體載藥系統的方法，通過向DNA四面體中加入不同濃度的藥物，從而獲得DNA四面體以及DNA四面體-藥物復合物，利用熒光毛細管電泳，實現對DNA四面體及其與藥物的復合物的檢測。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：首先選擇組成DNA四面體的DNA單鏈，其中，鏈4在5’端帶有熒光染料修飾；熒光染料為FAM，TAMRA或者ATTO。

將選擇的DNA單鏈溶解于TM緩沖液(20mM?Tris-HCl，50mM?MgCl₂，pH?8.0)中，使DNA單鏈的濃度為100μM。再將形成DNA四面體的四條單鏈等摩爾濃度混合在TM?buffer中，配成DNA單鏈的終濃度為1μM的樣品，在95℃下變性10min，隨后迅速降溫到4℃，保持3h，獲得DNA四面體結構；

形成DNA四面體的四條單鏈序列分別為:

S1:5’-AGG?CAG?TTG?AGA?CGA?ACA?TTC?CTA?AGT?CTG?AAA?TTT?ATC?ACC?CGC?CATAGT?AGA?CGT?ATC?ACC-3’

S2:5’-CTT?GCT?ACA?CGA?TTC?AGA?CTT?AGG?AAT?GTT?CGA?CAT?GCG?AGG?GTC?CAATAC?CGA?CGA?TTA?CAG-3’

S3:5’-GGT?GAT?AAA?ACG?TGT?AGC?AAG?CTG?TAA?TCG?ATT?TTA?ATG?CCA?AAG?ACACTC?GCT?ACA?TTG?GCA?TAA?ATA?ACT?ACT?ATG?GCG-3’

S4:FAM-5’-TAA?AAA?CGG?TAT?TGG?ACC?CTC?GCA?TGA?CTC?AAC?TGC?CTG?GTG?ATACGA?TAT?TT-3’。

向獲得的DNA四面體結構中加入藥物，經室溫、避光孵育后，得到DNA四面體及其與藥物的復合物；最后利用毛細管電泳檢測。

藥物為阿霉素、姜黃素、二甲基姜黃素或紫杉醇。

DNA四面體與藥物的摩爾濃度比為1:20-1:250；共孵育的時間為2-14h。