[發明專利]核苷轉移酶的新功能及應用

有效

• 申請號: 202011177308.5
• 申請日: 2020-10-28
• 公開（公告）號: CN112746063B
• 公開（公告）日: 2021-12-31
• 發明（設計）人: 江會鋒;逯曉云;盧麗娜
• 申請（專利權）人: 中國科學院天津工業生物技術研究所
• 主分類號: C12N9/12
• 分類號: C12N9/12;C12P19/34
• 代理公司: 北京知元同創知識產權代理事務所(普通合伙) 11535
• 代理人: 彭勁松;張炳楠

1.一種末端脫氧核糖核苷轉移酶（TDT）在催化3’端經可逆阻斷基團修飾的核苷酸聚合反應中的應用，所述可逆阻斷基團為O-氨基、O-烯丙基、O-疊氮基、O-磷酸基團中任一種，所述末端脫氧核糖核苷轉移酶選自：SEQ ID NO:2，SEQ ID NO:3，SEQ ID NO:4，SEQ ID NO:5，SEQ ID NO:6，SEQ ID NO:7，SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:9，SEQ ID NO:10，SEQ ID NO:11中任一序列所示的氨基酸序列。

2.根據權利要求1所述的應用，所述末端脫氧核糖核苷轉移酶分別來源于以下生物體：鴨嘴獸、鼠耳蝠、裸鼢鼠、黑猩猩、壁虎、鴯鹋、原雞、白喉雀、游隼、金雕。

3.根據權利要求1或2所述的應用，包括在所述末端脫氧核糖核苷轉移酶的存在下，使起始序列與至少一種核苷酸接觸，合成核酸分子。

4.一種不依賴模板鏈合成核酸分子的方法，其包括以下步驟：

a）提供起始序列；

b）在權利要求1或2的末端脫氧核糖核苷轉移酶（TDT）存在下，向所述起始序列中加入3’帶可逆阻斷基團的核苷酸；

c）從起始序列中去除TDT或去除溶劑；

d）在裂解劑存在下，從3’端帶可逆阻斷基團的核苷酸切割可逆阻斷基團；

e）去除裂解劑；

其中3’端帶可逆阻斷基團的核苷酸的所述阻斷基團為O-氨基、O-烯丙基、O-疊氮基、O-磷酸基團。

5.根據權利要求4所述的方法，其中通過重復步驟b)至e）加入大于1個核苷酸。

6.一種合成核酸分子的試劑盒，包含權利要求1或2所述的末端脫氧核糖核苷轉移酶，起始序列，一個或多個3’端帶可逆阻斷基團的核苷酸，以及裂解劑；所述3’端帶可逆阻斷基團的核苷酸的所述阻斷基團為O-氨基、O-烯丙基、O-疊氮基、O-磷酸基團。