[發(fā)明專利]一種快速區(qū)分蛹蟲草交配型的檢測方法及檢測引物組

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011176885.2
• 申請日: 2020-10-28
• 公開（公告）號: CN112094943A
• 公開（公告）日: 2020-12-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 鄒娟;李婷;陳紅汛;何英杰;羅麗媛;李嘉嘉;劉勝貴
• 申請（專利權(quán)）人: 懷化學(xué)院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/645
• 代理公司: 深圳市興科達知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44260
• 代理人: 殷瑜

本發(fā)明公開了一種快速高效檢測蛹蟲草不同菌株交配型的方法及檢測引物組，本發(fā)明基于等溫擴增技術(shù)，設(shè)計檢測蛹蟲草不同菌株交配型MAT1?1和MAT1?2的特異性引物(Cm1F/Cm1FIP/Cm1BIP/Cm1B和Cm2F/Cm2FIP/Cm2BIP/Cm2B)；四條引物Cm1F/Cm1FIP/Cm1BIP/Cm1B用于蛹蟲草MAT1?1交配型的檢測，另外四條引物Cm2F/Cm2FIP/Cm2BIP/Cm2B用于MAT1?2交配型的檢測。本發(fā)明檢測結(jié)果特性性強，簡單快速，只需將試劑混合后置于恒溫水浴鍋中反應(yīng)，通過混合液的顏色即可快速區(qū)分交配型。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種快速區(qū)分蛹蟲草交配型的檢測方法及檢測引物組。

背景技術(shù)

蛹蟲草(Cordyceps militaris)是蟲草屬真菌的模式種，又稱為北冬蟲夏草等，屬藥食兩用真菌，隸屬于子囊菌門(Ascomycota)，糞殼菌綱(Sordariomycetes)，肉座菌目(Hypocreales)，蟲草科(Cordycipitaceae)，蟲草屬(Cordyceps)。近幾十年來，蛹蟲草資源的研究和開發(fā)取得了很大進展，目前已實現(xiàn)大規(guī)模人工栽培。

蛹蟲草為二極性異宗結(jié)合真菌，具有MAT1-1和MAT1-2兩種交配型，其有性生殖需要兩種交配型菌株的參與。作為生產(chǎn)使用的菌種，需明確不同來源菌種的交配型，避免部分遺傳背景等特征不清楚，例如不單一或混雜的菌種同時有兩個交配型，導(dǎo)致蛹蟲草栽培形成畸形子實體，品質(zhì)下降甚至減產(chǎn)等嚴(yán)重問題。目前為止，為明確不同來源菌種交配型，需進行PCR反應(yīng)以明確菌株的交配類型，這種對不同菌種交配型鑒定的方法存在效率低，需要鑒定所需時間長，步驟繁瑣，需要PCR預(yù)變形、溫度循環(huán)、膠電泳和紫外顯影等步驟。因此，研究快速檢測蛹蟲草菌株交配型的方法，對于菌種鑒定、改良和子實體的培育具有重要理論和實踐價值。

發(fā)明內(nèi)容

為解決上述問題，本發(fā)明提供了一種快速區(qū)分蛹蟲草交配型的檢測方法。本發(fā)明檢測結(jié)果特性性強，簡單快速，只需將試劑混合后置于恒溫水浴鍋中反應(yīng)，通過混合液的顏色即可快速區(qū)分交配型。

一種快速區(qū)分蛹蟲草交配型的檢測引物組，包括蛹蟲草交配型MAT1-1引物組和蛹蟲草交配型MAT1-2引物組；蛹蟲草交配型MAT1-1引物組包括序列SEQ ID NO:1、序列SEQ IDNO:2、序列SEQ ID NO:3和序列SEQ ID NO:4；所述蛹蟲草交配型MAT1-2引物組包括序列SEQID NO:5、序列SEQ ID NO:6、序列SEQ ID NO:7和序列SEQ ID NO:8。

一種快速區(qū)分蛹蟲草交配型的檢測方法，包括如下步驟：

步驟一、將待檢測物和環(huán)介導(dǎo)等溫擴增緩沖液分別與蛹蟲草交配型MAT1-1引物組和蛹蟲草交配型MAT1-2引物組混合，得到混合反應(yīng)液；蛹蟲草交配型MAT1-1引物組包括序列SEQ ID NO:1、序列SEQ ID NO:2、序列SEQ ID NO:3和序列SEQ ID NO:4；所述蛹蟲草交配型MAT1-2引物組包括序列SEQ ID NO:5、序列SEQ ID NO:6、序列SEQ ID NO:7和序列SEQ IDNO:8；

步驟二、將混合反應(yīng)液加熱進行環(huán)介導(dǎo)等溫擴增；

步驟三、若加入蛹蟲草交配型MAT1-1引物組的混合反應(yīng)液變色則待檢測物為蛹蟲草交配型MAT1-1；若加入蛹蟲草交配型MAT1-2引物組的混合反應(yīng)液變色則待檢測物為蛹蟲草交配型MAT1-2。